| 本研究的创新点 | 第1页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 缩略词 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-61页 |
| 第一章 鸭乙型肝炎病毒的研究进展 | 第18-46页 |
| 1 DHBV生物学特性 | 第18-34页 |
| ·包膜蛋白 | 第19-22页 |
| ·核蛋白 | 第22-26页 |
| ·P蛋白 | 第26-31页 |
| ·X抗原 | 第31-34页 |
| 2 DHBV感染鸭原代肝细胞模型 | 第34-36页 |
| ·DHBV感染鸭原代肝细胞模型的建立 | 第34-35页 |
| ·DHBV感染鸭原代肝细胞模型的应用 | 第35-36页 |
| 3 DHBV感染鸭动物模型 | 第36-39页 |
| ·DHBV感染动物模型的建立 | 第36-37页 |
| ·DHBV感染动物模型的影响因素 | 第37-39页 |
| 4 DHBV感染动物模型的相关研究及应用 | 第39-44页 |
| ·DHBV感染鸭的各种动物模型 | 第39-42页 |
| ·DHBV突变株的生物学意义 | 第42-43页 |
| ·抗HBV药物筛选模型 | 第43-44页 |
| ·液制品消毒学领域的应用 | 第44页 |
| 5 小结 | 第44-46页 |
| ·存在的问题 | 第44-45页 |
| ·展望 | 第45-46页 |
| 第二章 病毒功能性蛋白的原核表达及其应用的研究进展 | 第46-61页 |
| 1 概述 | 第46页 |
| 2 病毒功能性蛋白表达采用的原核表达系统 | 第46-52页 |
| ·原核表达系统 | 第47-50页 |
| ·外源基因在大肠杆菌细胞中的表达 | 第50-51页 |
| ·影响克隆基因在大肠杆菌细胞中表达效率的因素 | 第51-52页 |
| 3 病毒功能性基因的原核表达 | 第52-57页 |
| ·嗜肝DNA病毒的原核表达 | 第52-54页 |
| ·鸭乙型肝炎病毒preS蛋白的功能及其原核表达 | 第54-57页 |
| 4 应用前景 | 第57-61页 |
| ·preS蛋白的功能研究 | 第57-59页 |
| ·preS抗原的诊断及预后作用 | 第59页 |
| ·preS抗原与疫苗 | 第59-61页 |
| 第二部分 实验研究 | 第61-158页 |
| 第三章 DHBV阳性血清的分离、全基因组的克隆及序列分析 | 第61-84页 |
| 1 材料 | 第61-63页 |
| ·实验动物 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·菌株及质粒 | 第61-62页 |
| ·主要试剂配制 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-68页 |
| ·阳性血清的分离 | 第63-65页 |
| ·DHBV全基因组的克隆 | 第65-68页 |
| 3 试验结果 | 第68-78页 |
| ·血清DHBV-DNA的分离 | 第68-69页 |
| ·DHBV全基因序列扩增和克隆 | 第69页 |
| ·四川麻鸭DHBV全基因测序结果 | 第69-71页 |
| ·四川麻鸭DHBV全基因序列分析 | 第71-78页 |
| 4 讨论 | 第78-83页 |
| 5 小结 | 第83-84页 |
| 第四章 DHBV PRES基因表达质粒的构建与表达 | 第84-102页 |
| 1 材料 | 第84-86页 |
| ·菌株及表达载体 | 第84页 |
| ·试验动物 | 第84页 |
| ·常用材料与试剂 | 第84页 |
| ·主要试剂配制 | 第84-85页 |
| ·仪器与设备 | 第85-86页 |
| 2 方法 | 第86-94页 |
| ·扩增目的基因的引物设计 | 第86页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第86-87页 |
| ·PCR产物的鉴定 | 第87页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第87-89页 |
| ·转化表达菌株BL21 | 第89页 |
| ·诱导表达 | 第89页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第89-90页 |
| ·Western blotting检测 | 第90页 |
| ·表达蛋白的可溶性和不可溶性分析 | 第90-91页 |
| ·表达条件的优化 | 第91页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达 | 第91页 |
| ·Ni—NTA亲和层析纯化重组蛋白的纯化 | 第91-92页 |
| ·纯化蛋白的应用 | 第92-94页 |
| 3 结果 | 第94-98页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第94页 |
| ·T载体克隆及测序鉴定 | 第94页 |
| ·原核表达质粒的构建及鉴定 | 第94页 |
| ·诱导表达 | 第94-95页 |
| ·可溶性分析 | 第95页 |
| ·免疫印迹 | 第95页 |
| ·表达条件的优化 | 第95-96页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第96页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化蛋白 | 第96-97页 |
| ·纯化蛋白的应用 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-101页 |
| 5 小结 | 第101-102页 |
| 第五章 基于鸭乙型肝炎病毒PRES蛋白免疫组化方法建立及其病毒感染鸭的抗原定位 | 第102-117页 |
| 1 材料 | 第102-103页 |
| ·试验毒株 | 第102页 |
| ·试验动物 | 第102页 |
| ·主要仪器 | 第102-103页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·主要试剂配制 | 第103页 |
| 2 方法 | 第103-107页 |
| ·雏鸭人工感染DHBV疾病模型的复制 | 第103-104页 |
| ·雏鸭人工感染DHBV标本采集 | 第104页 |
| ·免疫组化检测DHBV方法的建立 | 第104-107页 |
| 3 结果 | 第107-111页 |
| ·免疫组化方法的建立 | 第107-109页 |
| ·免疫组化检测各组织器官的定位研究 | 第109-111页 |
| 4 讨论 | 第111-116页 |
| ·免疫组化方法检测DHBsAg的建立 | 第111-114页 |
| ·免疫组化方法检测DHBsAg建立的意义 | 第114-115页 |
| ·免疫组化方法对DHBsAg的定位研究 | 第115-116页 |
| 5 小结 | 第116-117页 |
| 第六章 实时荧光定量PCR检测鸭乙型肝炎病毒方法的建立 | 第117-125页 |
| 1 材料 | 第117-118页 |
| ·试验毒株 | 第117页 |
| ·主要仪器 | 第117页 |
| ·主要试剂 | 第117-118页 |
| 2 方法 | 第118-119页 |
| ·标准品的制备 | 第118页 |
| ·待检标本的来源 | 第118页 |
| ·FQ-PCR条件的建立和优化 | 第118-119页 |
| ·FQ-PCR的敏感性检测 | 第119页 |
| ·FQ-PCR的特异性检测 | 第119页 |
| ·FQ-PCR的可重复性检测 | 第119页 |
| 3 结果 | 第119-121页 |
| ·反应体系的优化 | 第119页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第119-120页 |
| ·荧光定量PCR稳定性和重复性试验 | 第120页 |
| ·荧光定量PCR特异性试验 | 第120-121页 |
| ·荧光定量PCR敏感性试验 | 第121页 |
| 4 讨论 | 第121-124页 |
| 5 结论 | 第124-125页 |
| 第七章 鸭乙型肝炎病毒在感染鸭体内侵染规律 | 第125-141页 |
| 1 材料 | 第125-126页 |
| ·试验毒株 | 第125页 |
| ·试验动物 | 第125页 |
| ·主要仪器 | 第125-126页 |
| ·主要试剂 | 第126页 |
| 2 方法 | 第126-127页 |
| ·雏鸭人工感染DHBV疾病模型的复制 | 第126页 |
| ·雏鸭人工感染DHBV疾病模型的病理组织学研究 | 第126页 |
| ·DHBV在感染鸭体内的侵染和分布规律 | 第126-127页 |
| ·雏鸭人工感染DHBV疾病模型的血液生化指标的研究 | 第127页 |
| 3 结果 | 第127-135页 |
| ·病理组织学变化 | 第127-128页 |
| ·免疫组化检测各组织器官的变化规律 | 第128-131页 |
| ·DHBV-DNA在血清和肝组织中的变化规律 | 第131-132页 |
| ·血液病理学变化 | 第132-135页 |
| 4 讨论 | 第135-140页 |
| ·雏鸭人工感染DHBV后在体内的侵染规律及其意义 | 第135-137页 |
| ·DHBV感染发病机理探讨 | 第137页 |
| ·病理组织学和血液生化指标变化规律 | 第137-140页 |
| 5 小结 | 第140-141页 |
| 第八章 免疫组化、FQ-PCR和鸭乙型肝炎病毒感染模型联合评价抗人类乙肝新药的实验研究 | 第141-158页 |
| 1 材料 | 第141-142页 |
| ·供试药物 | 第141页 |
| ·常用材料与试剂 | 第141-142页 |
| ·仪器与设备 | 第142页 |
| ·试剂配制 | 第142页 |
| 2 体外实验方法 | 第142-147页 |
| ·细胞株 | 第142-143页 |
| ·HepG2 2.2.15细胞的传代与培养 | 第143页 |
| ·细胞毒性试验 | 第143-144页 |
| ·对细胞分泌(上清)的HBsAg、HBeAg的抑制试验 | 第144-145页 |
| ·上清病毒基因组DNA的分离及定量检测 | 第145-146页 |
| ·细胞总DNA的提取及定量检测 | 第146-147页 |
| 3 体内实验方法 | 第147-148页 |
| ·毒株 | 第147页 |
| ·主要试剂 | 第147页 |
| ·实验动物及分组 | 第147页 |
| ·鸭肝组织标本形态学观察 | 第147-148页 |
| 4 结果 | 第148-155页 |
| ·受试药物对HepG 2.2.15细胞毒性作用结果 | 第148页 |
| ·受试化合物细胞水平药效学研究结果 | 第148-150页 |
| ·FQ-PCR检测血清和肝组织中DHBV-DNA的结果 | 第150-151页 |
| ·病理学检查结果 | 第151-155页 |
| 5 讨论 | 第155-157页 |
| 6 小结 | 第157-158页 |
| 参考文献 | 第158-176页 |
| 致谢 | 第176-177页 |
| 攻博期间发表的论文 | 第177页 |
