| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 Ⅰ型鸭病毒性肝炎研究进展 | 第13-18页 |
| ·病原学研究 | 第13-15页 |
| ·DHV-Ⅰ分类地位 | 第13页 |
| ·DHV-Ⅰ形态及理化特性 | 第13-14页 |
| ·DHV-Ⅰ增殖特性 | 第14页 |
| ·DHV-Ⅰ基因组结构 | 第14-15页 |
| ·DHV-Ⅰ基因组非编码区 | 第14-15页 |
| ·DHV-Ⅰ基因组编码区 | 第15页 |
| ·流行病学 | 第15-16页 |
| ·临床症状、病理及组织学变化 | 第16-17页 |
| ·临床症状 | 第16页 |
| ·病理及组织学变化 | 第16-17页 |
| ·DHV-Ⅰ诊断 | 第17页 |
| ·防制 | 第17-18页 |
| ·综合管理措施 | 第17页 |
| ·免疫接种 | 第17-18页 |
| ·展望 | 第18页 |
| 2 昆虫杆状病毒表达载体系统 | 第18-21页 |
| ·杆状病毒简介 | 第18-19页 |
| ·杆状病毒载体表达系统特点 | 第19页 |
| ·重组杆状病毒构建和筛选 | 第19-21页 |
| 1 引言 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·毒株、菌种、载体与细胞 | 第22页 |
| ·实验动物与血清 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达 | 第23-30页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·病毒的扩增及RNA的提取 | 第23页 |
| ·RT-PCR扩增VP1基因 | 第23-24页 |
| ·反转录(RT) | 第23页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第23-24页 |
| ·RT-PCR产物回收与纯化 | 第24页 |
| ·PCR产物与转移载体pFastbac Ⅰ双酶切处理 | 第24页 |
| ·酶切产物的回收与纯化 | 第24页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25页 |
| ·质粒DNA小量制备 | 第25-26页 |
| ·重组转移质粒的PCR鉴定 | 第26页 |
| ·重组转移质粒的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·VP1基因序列测定 | 第26页 |
| ·重组穿梭载体rBacmid-VP1的构建 | 第26-27页 |
| ·位点特异性转座 | 第26-27页 |
| ·重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1提取 | 第27页 |
| ·重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1的PCR鉴定 | 第27页 |
| ·重组杆状病毒的获得与病毒扩增 | 第27-28页 |
| ·rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf9获得P1代病毒 | 第27-28页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第28页 |
| ·P4代病毒PCR鉴定 | 第28页 |
| ·重组杆状病毒基因组DNA提取 | 第28页 |
| ·重组杆状病毒的PCR鉴定 | 第28页 |
| ·VP1蛋白在昆虫细胞中表达的检测 | 第28-30页 |
| ·SDS-PAGE分析VP1蛋白在昆虫细胞中的表达 | 第28-29页 |
| ·Western-blot检测VP1蛋白 | 第29-30页 |
| ·真核质粒pcDNA-VP1的构建及小鼠免疫试验 | 第30-32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·病毒的扩增及RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR扩增VP1基因 | 第30页 |
| ·反转录(RT) | 第30页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第30页 |
| ·RT-PCR产物的回收 | 第30页 |
| ·PCR产物与pcDNA3.1(+)载体双酶切 | 第30-31页 |
| ·酶切产物的回收与纯化 | 第31页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·质粒DNA小量制备 | 第31页 |
| ·重组转移质粒的PCR鉴定 | 第31页 |
| ·重组转移质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·VP1基因序列测定 | 第31-32页 |
| ·pcDNA-VP1质粒大量抽提纯化 | 第32页 |
| ·质粒pcDNA-VP1浓度测定 | 第32页 |
| ·真核质粒pcDNA-VP1免疫小鼠试验 | 第32-34页 |
| ·小鼠免疫与分组 | 第32页 |
| ·DHV-Ⅰ的纯化 | 第32-33页 |
| ·免疫小鼠血清特异性抗体测定 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·VP1基因的扩增 | 第34页 |
| ·重组转移质粒pFastbac-VP1构建与鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组杆状病毒穿梭质粒的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第36-37页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| ·Western-blot检测表达产物 | 第37-38页 |
| ·重组真核质粒pcDNA-VP1的构建 | 第38-39页 |
| ·真核质粒pcDNA-VP1纯化与浓度测定 | 第39-40页 |
| ·纯化的DHV-Ⅰ浓度测定 | 第40页 |
| ·pcDNA-VP1诱导小鼠的体液免疫应答 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| ·杆状病毒表达系统的选择 | 第41页 |
| ·结构蛋白VP1表达水平及其影响因素 | 第41-42页 |
| ·VP1基因在昆虫细胞中的表达 | 第42页 |
| ·pcDNA-VP1真核表达质粒免疫小鼠试验 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录 | 第49-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
| 在读期间发表论文 | 第53页 |
