| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一部分 抑制差减杂交构建海马齿根系盐诱导差异表达基因CDNA文库 | 第13-51页 |
| 1 前言 | 第13-30页 |
| ·植物耐盐的生理机制 | 第13-17页 |
| ·离子平衡机制 | 第13-14页 |
| ·离子的选择性吸收 | 第13-14页 |
| ·离子区隔化 | 第14页 |
| ·渗透调节机制 | 第14-15页 |
| ·无机渗调 | 第14-15页 |
| ·有机渗调 | 第15页 |
| ·抗氧化防御系统 | 第15-16页 |
| ·激素调节 | 第16-17页 |
| ·光合途径的改变 | 第17页 |
| ·植物耐盐的分子机制 | 第17-26页 |
| ·植物耐盐(盐诱导)基因的克隆与转基因工程研究进展 | 第17-22页 |
| ·离子平衡相关基因 | 第17-18页 |
| ·小分子渗调物质合成及基因表达 | 第18-20页 |
| ·大分子渗调蛋白合成相关基因 | 第20-21页 |
| ·光合作用与代谢相关基因 | 第21-22页 |
| ·植物耐盐信号转导途径研究进展 | 第22-26页 |
| ·促细胞分裂剂激活性蛋白激酶信号传导途径 | 第22-23页 |
| ·盐过敏感信号传导途径 | 第23-24页 |
| ·钙依赖而钙调素不依赖的蛋白激酶 | 第24-25页 |
| ·非生物胁迫应答转录调控网络 | 第25-26页 |
| ·海马齿研究简述 | 第26-27页 |
| ·抑制差减杂交技术及其在植物研究中的应用 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| ·本研究的技术路线 | 第29-30页 |
| 2 材料和方法 | 第30-40页 |
| ·材料与试剂 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·生化试剂 | 第30页 |
| ·方法与步骤 | 第30-40页 |
| ·RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·利用SMART PCR cDNA合成技术合成双链cDNA | 第31-33页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第31-32页 |
| ·LD-PCR最佳循环数的确定与双链cDNA扩增 | 第32页 |
| ·双链cDNA的纯化 | 第32-33页 |
| ·抑制差减杂交 | 第33-36页 |
| ·限制性内切酶Rsa Ⅰ消化双链cDNA | 第33页 |
| ·Rsa Ⅰ消化产物回收 | 第33页 |
| ·接头连接 | 第33-34页 |
| ·第一次杂交 | 第34-35页 |
| ·第二次杂交 | 第35页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第36页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第36-37页 |
| ·第二次PCR扩增产物的纯化 | 第36-37页 |
| ·连接pMD18-T载体 | 第37页 |
| ·转化感受态宿主菌 | 第37页 |
| ·菌落PCR方法鉴定重组子 | 第37-38页 |
| ·反向Northern斑点杂交筛选阳性差异片段克隆 | 第38-39页 |
| ·探针标记 | 第38页 |
| ·菌落PCR产物斑点印迹转膜 | 第38页 |
| ·预杂交和杂交 | 第38-39页 |
| ·杂交后洗膜 | 第39页 |
| ·免疫检测 | 第39页 |
| ·显色 | 第39页 |
| ·序列分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-47页 |
| ·RNA的提取 | 第40页 |
| ·LD-PCR循环数的确定与双链cDNA的扩增 | 第40-41页 |
| ·双链cDNA的RSA Ⅰ酶切消化检测 | 第41页 |
| ·抑制差减杂交的PCR扩增结果 | 第41页 |
| ·抑制差减杂交文库的构建 | 第41-42页 |
| ·重组子的筛选 | 第42页 |
| ·反向NORTHERN斑点杂交筛选阳性差异片段克隆 | 第42-43页 |
| ·基因片段序列分析 | 第43-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·关于研究材料 | 第47页 |
| ·关于序列同源性的检索及分类 | 第47-48页 |
| ·关于SSH技术 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第二部分 海马齿果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因(SPFBA)的克隆与分析 | 第51-79页 |
| 1 前言 | 第51-55页 |
| ·FBA基本性质 | 第51页 |
| ·FBA催化机制 | 第51-52页 |
| ·植物中的FBA | 第52-53页 |
| ·利用磷酸己糖的生物合成途径:蔗糖和淀粉的合成 | 第52页 |
| ·基因工程研究 | 第52-53页 |
| ·目的意义 | 第53-54页 |
| ·本研究的技术路线 | 第54-55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-66页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·菌株和质粒 | 第55页 |
| ·生化试剂 | 第55页 |
| ·方法与步骤 | 第55-66页 |
| ·RNA的提取 | 第55页 |
| ·SpFBA基因的3'RACE和5'RACE扩增 | 第55-59页 |
| ·RACE-cDNA第一链的合成 | 第55-56页 |
| ·基因特异性引物(GSP)的设计 | 第56页 |
| ·PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·PCR产物的回收 | 第57-58页 |
| ·目的片段的克隆 | 第58页 |
| ·菌落PCR筛选重组子 | 第58页 |
| ·测序与全长序列拼接 | 第58-59页 |
| ·SpFBA全长cDNA的PCR扩增 | 第59-60页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第59页 |
| ·引物设计 | 第59页 |
| ·PCR扩增 | 第59-60页 |
| ·PCR产物的回收 | 第60页 |
| ·PCR目的片段的克隆及重组子的筛选 | 第60页 |
| ·SpFBA RT-PCR表达分析 | 第60-62页 |
| ·材料的处理 | 第60页 |
| ·RNA的提取 | 第60-61页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第61页 |
| ·引物设计 | 第61页 |
| ·模板量的确定 | 第61页 |
| ·Actin基因和SpFBA基因指数增长期的确定 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR分析 | 第62页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第62-63页 |
| ·SpFBA基因的酶切 | 第62页 |
| ·原核表达载体的pET28a(+)酶切 | 第62页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第62-63页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第63页 |
| ·重组SpFBA蛋白的表达 | 第63页 |
| ·重组SpFBA蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| ·重组SpFBA蛋白的酶活性检测 | 第65页 |
| ·重组菌BL21(pET+SpFBA)的耐盐性分析 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-76页 |
| ·RNA的提取 | 第66页 |
| ·SPFBA基因的克隆 | 第66-69页 |
| ·反向Northern斑点杂交鉴定差异表达基因EST片段 | 第66-67页 |
| ·RACE技术扩增SpFBA 3'和5'末端 | 第67页 |
| ·SpFBA全长cDNA克隆 | 第67-69页 |
| ·SPFBA的生物信息学分析 | 第69-71页 |
| ·SpFBA蛋白质序列分析 | 第69页 |
| ·SpFBA同源性和系统发育分析 | 第69-71页 |
| ·SPFBA的RT-PCR分析 | 第71-73页 |
| ·指数增长期的确定 | 第71页 |
| ·SpFBA在不同组织的表达分析 | 第71-72页 |
| ·海水和NaCl处理对SpFBA在根中表达的影响 | 第72页 |
| ·ABA和PEG处理对SpFBA在根中表达的影响 | 第72-73页 |
| ·重组SPFBA的表达、纯化与活性检测 | 第73-75页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第73页 |
| ·重组SpFBA的表达、纯化与活性检测 | 第73-75页 |
| ·PET+SPFBA转基因大肠杆菌的耐盐性实验 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
