| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-25页 |
| 1 肝素酶的分类及结构 | 第16-18页 |
| ·分类 | 第16-17页 |
| ·基本序列和结构 | 第17-18页 |
| 2 肝素酶的稳定性 | 第18-19页 |
| 3 肝素酶的发酵生产 | 第19页 |
| ·生产工艺 | 第19页 |
| ·其他产肝素酶菌株 | 第19页 |
| 4 重组肝素酶的生产 | 第19-21页 |
| ·重组肝素酶Ⅰ | 第19-21页 |
| ·其它肝素酶重组体 | 第21页 |
| 5 肝素酶的应用 | 第21-22页 |
| ·生产低分子肝素 | 第21页 |
| ·体外循环中消除肝素 | 第21页 |
| ·研究肝素的精确结构和低聚寡糖活性筛选 | 第21-22页 |
| ·药用研究 | 第22页 |
| 6 肝素酶研究中存在的问题及研究热点 | 第22-23页 |
| ·不稳定性 | 第22页 |
| ·糖基化 | 第22-23页 |
| ·融合表达 | 第23页 |
| ·表达体系 | 第23页 |
| 7 本课题拟研究的问题 | 第23-25页 |
| 第二章 源自肝素黄杆菌(NBRC 12017)的肝素酶Ⅰ基因碱基突变鉴定及其酶活测定 | 第25-42页 |
| 1.材料 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·分子生物学试剂 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| 2 实验步骤与方法 | 第27-34页 |
| ·测序载体构建方案 | 第27-28页 |
| ·目的基因的获得 | 第28-30页 |
| ·目的基因的克隆 | 第30-33页 |
| ·肝素酶Ⅰ活性测定 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-41页 |
| ·目的基因的克隆 | 第34-37页 |
| ·HepA基因测序及序列分析 | 第37-40页 |
| ·肝素酶Ⅰ活性实验 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 突变型肝素酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的克隆、表达复性及纯化 | 第42-76页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·菌株及质粒 | 第42页 |
| ·试剂与材料 | 第42-43页 |
| 2 实验步骤与方法 | 第43-59页 |
| ·表达载体及其构建流程 | 第43-45页 |
| ·肝素酶Ⅰ大肠杆菌表达载体pET22b/H1的构建 | 第45-48页 |
| ·肝素酶Ⅰ大肠杆菌表达载体pET28a/H1的构建 | 第48-50页 |
| ·肝素酶Ⅰ大肠杆菌表达载体pET28a/H2的构建 | 第50-53页 |
| ·表达肝素酶Ⅰ的大肠杆菌工程菌株的构建 | 第53-54页 |
| ·肝素酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第54-57页 |
| ·肝素酶Ⅰ包涵体复性及纯化 | 第57-59页 |
| 3 结果 | 第59-72页 |
| ·重组载体pET22b/H1,pET28a/H1,pET28a/H2的构建 | 第59-63页 |
| ·大肠杆菌Rosetta工程菌株的构建 | 第63-65页 |
| ·肝素酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第65-69页 |
| ·肝素酶Ⅰ包涵体复性及纯化 | 第69-72页 |
| ·肝素酶Ⅰ活性检测 | 第72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| 总结 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第92-93页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第93页 |
