| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 绪论 | 第11-25页 |
| 1 研究背景 | 第11-14页 |
| ·生物质能概念及其分类 | 第11-13页 |
| ·燃料乙醇的优点及其发展方向 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母是传统的乙醇代谢菌株 | 第14页 |
| 2 酿酒酵母育种方法的发展情况 | 第14-17页 |
| ·常规育种 | 第15-16页 |
| ·原生质体融合育种 | 第16页 |
| ·分子育种 | 第16-17页 |
| 3 基因敲除技术 | 第17-21页 |
| ·基因插入突变 | 第18页 |
| ·RNA干扰 | 第18-19页 |
| ·基因同源重组 | 第19-21页 |
| ·基因敲除技术展望 | 第21页 |
| 4 3-磷酸甘油脱氢酶和3-磷酸甘油酯酶对甘油代谢的影响 | 第21-23页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶 | 第21-22页 |
| ·3-磷酸甘油酯酶 | 第22-23页 |
| 5 本研究目的意义 | 第23-25页 |
| 第一章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 第一节 实验材料 | 第25-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第26-27页 |
| ·酶和试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·试剂与溶液的配制 | 第28-31页 |
| 第二节 实验方法 | 第31-41页 |
| ·Cre/LoxP系统 | 第31页 |
| ·酵母YS2基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第32页 |
| ·通过菌落PCR来验证酵母菌落 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·质粒pUG6与pSH65的转化 | 第33-34页 |
| ·碱裂解法制取pUG6及pSH65质粒DNA | 第34-35页 |
| ·UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回收DNA | 第35-36页 |
| ·乙醇沉淀DNA | 第36页 |
| ·平板影印法 | 第36页 |
| ·LiAc/SS载体DNA/PEG化学高效转化法 | 第36-38页 |
| ·突变株生理特性的实验 | 第38页 |
| ·突变株乙醇代谢的发酵测定实验 | 第38-39页 |
| ·突变株发酵甘油的测定 | 第39-41页 |
| 第二章 结果与讨论 | 第41-57页 |
| 第一节 实验结果 | 第41-55页 |
| ·酵母出发菌(YS2)基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·酵母YS2的HOR2基因的存在性验证 | 第41-42页 |
| ·质粒pUG6、pSH65的扩增及鉴定 | 第42-45页 |
| ·质粒pUG6、pSH65的扩增 | 第42-43页 |
| ·质粒pUG6的酶切验证 | 第43-44页 |
| ·质粒pSH65的酶切验证 | 第44-45页 |
| ·构建HOR2基因敲除组件 | 第45-47页 |
| ·HOR2基因敲除组件的构建 | 第45-46页 |
| ·基因敲除组件的测序验证 | 第46-47页 |
| ·HOR2基因的敲除 | 第47-51页 |
| ·HOR2基因敲除组件的转化及其克隆子筛选 | 第47-48页 |
| ·克隆子验证 | 第48-49页 |
| ·kan~T筛选标记的切除 | 第49-51页 |
| ·HOR2等位基因的敲除 | 第51页 |
| ·YS2-HOR2突变株生理特性试验 | 第51-52页 |
| ·突变株生长状况 | 第51-52页 |
| ·突变株的稳定性实验 | 第52页 |
| ·突变株发酵液甘油和乙醇产量的测定 | 第52-55页 |
| ·突变株YS2-HOR2发酵液甘油产量测定 | 第52-53页 |
| ·突变株YS2-HOR2发酵液乙醇含量的测定 | 第53-55页 |
| 第二节 讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 结论 | 第57-59页 |
| 附录1 波美度、糖度、比重换算表 | 第59-61页 |
| 附录2 主要符号对照表 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |