中文摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
符号说明 | 第8-12页 |
上篇 文献综述 | 第12-22页 |
第一章 血吸虫生物学概论 | 第12-15页 |
1 血吸虫病 | 第12页 |
2 血吸虫生活史 | 第12-13页 |
3 血吸虫致病作用 | 第13-14页 |
4 血吸虫病的防治 | 第14-15页 |
第二章 RNA 干扰技术的研究概况 | 第15-20页 |
1 RNA 干扰现象的发现 | 第15-16页 |
2 RNA 干扰的原理 | 第16-17页 |
3 RNA 干扰技术的应用 | 第17-20页 |
·RNAi 在基因组学中的应用 | 第18页 |
·RNAi 在抗病毒治疗中的应用 | 第18-19页 |
·药物开发 | 第19-20页 |
第三章 Argonaute 蛋白研究进展 | 第20-22页 |
1 Argonaute 蛋白家族 | 第20页 |
2 Argonaute 蛋白结构 | 第20-22页 |
下篇 研究内容 | 第22-82页 |
第一章 日本血吸虫 AGO1 蛋白的研究 | 第22-54页 |
1 材料 | 第22-23页 |
·实验动物 | 第22页 |
·主要试剂 | 第22-23页 |
·主要仪器 | 第23页 |
2 方法 | 第23-39页 |
·溶液的配制 | 第23-26页 |
·EST 来源和RACE 引物 | 第26页 |
·总RNA 的提取 | 第26-27页 |
·5' RACE 扩增 | 第27-31页 |
·AGO1 生物信息学分析 | 第31页 |
·实时荧光定量PCR 检测AGO1 期别转录差异 | 第31-33页 |
·AGO1 保守功能域及全长的原核表达质粒的构建 | 第33-36页 |
·AGO1 保守功能域及全长蛋白的原核表达 | 第36-37页 |
·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
·AGO1 多克隆抗体的制备 | 第38-39页 |
·免疫印迹分析AGO1 性别差异表达 | 第39页 |
3 结果 | 第39-52页 |
·编码AGO1 基因全长cDNA 获得及生物信息学分析 | 第39-45页 |
·AGO1 基因转录期别差异分析 | 第45页 |
·AGO1 保守功能域和全长原核表达质粒的构建 | 第45-47页 |
·AGO1 保守功能域和全长的原核表达及蛋白纯化 | 第47-51页 |
·AGO1 多克隆抗体的制备及性别差异表达分析 | 第51-52页 |
4 讨论 | 第52-54页 |
第二章 日本血吸虫 AGO2 蛋白的研究 | 第54-75页 |
1 材料 | 第54-55页 |
·实验动物 | 第54页 |
·主要试剂 | 第54页 |
·主要仪器 | 第54-55页 |
2 方法 | 第55-64页 |
·EST 来源和RACE 引物 | 第55页 |
·总RNA 的提取 | 第55页 |
·RACE 扩增 | 第55-60页 |
·生物信息学分析 | 第60页 |
·AGO2 保守功能域原核表达载体的构建 | 第60-62页 |
·AGO2 保守功能域的原核表达 | 第62-63页 |
·重组蛋白的纯化 | 第63页 |
·AGO2 多克隆抗体的制备 | 第63页 |
·免疫印迹分析AGO2 性别和期别表达差异 | 第63-64页 |
3 结果 | 第64-74页 |
·编码AGO2 基因全长cDNA 获得及生物信息学分析 | 第64-69页 |
·AGO2 保守功能域原核表达质粒的构建 | 第69-71页 |
·AGO2 保守功能域的原核表达及蛋白纯化 | 第71-72页 |
·AGO2 多克隆抗体的制备及性别期别差异表达分析 | 第72-74页 |
4 讨论 | 第74-75页 |
第三章 RNA 干扰 AGO1 基因影响其转录表达的研究 | 第75-82页 |
1 材料 | 第75-77页 |
·实验动物 | 第75页 |
·主要试剂 | 第75-76页 |
·siRNA | 第76页 |
·童虫培养基成分 | 第76-77页 |
·主要仪器 | 第77页 |
2 方法 | 第77-79页 |
·兔红细胞的制备 | 第77页 |
·日本血吸虫14d 童虫的收集及体外培养 | 第77-78页 |
·荧光定量PCR 分析干扰效果 | 第78页 |
·免疫印迹分析干扰效果 | 第78-79页 |
3 结果 | 第79-80页 |
·虫体成活率分析 | 第79页 |
·荧光定量PCR 分析干扰效果 | 第79页 |
·免疫印迹分析干扰效果 | 第79-80页 |
4 讨论 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-88页 |
全文结论 | 第88-89页 |
攻读硕士学位期间发表的文章 | 第89-90页 |
致谢 | 第90-91页 |