| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-50页 |
| 1 大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第14-27页 |
| ·大肠杆菌表达系统概述 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌表达系统的组成 | 第15-18页 |
| ·各种类型表达系统的构成及特点 | 第18-20页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌系统中表达的因素 | 第20-23页 |
| ·大肠杆菌胞内的共表达策略 | 第23-25页 |
| ·大肠杆菌表达系统研究的新进展 | 第25-27页 |
| 2 原核生物操纵系统 | 第27-34页 |
| ·操纵元的正负调控 | 第27页 |
| ·操纵系统中的启动子 | 第27-30页 |
| ·不同操纵系统中的DNA环 | 第30-34页 |
| 3 乙基对硫磷水解酶相关研究及酶的体外定向进化 | 第34-41页 |
| ·乙基对硫磷水解酶(parathion hydrolase)的研究现状 | 第34-35页 |
| ·酶的体外定向进化 | 第35-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 第二章 基于阿拉伯糖操纵元调控元件及rRNA rrnB P1启动子的表达系统的构建及验证 | 第50-76页 |
| 1 材料与方法 | 第51-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第51-52页 |
| ·培养基与试剂 | 第52页 |
| ·培养条件 | 第52页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第52页 |
| ·表达载体及调节基因(araC)重组质粒的构建 | 第52-61页 |
| ·报告基因(cel5G)重组质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·质粒共转化 | 第62页 |
| ·重组质粒共表达 | 第62-63页 |
| ·培养时间对质粒共存的影响 | 第63页 |
| ·转接培养对质粒共存的影响 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-72页 |
| ·表达载体及调节基因(araC)重组质粒的构建 | 第63-67页 |
| ·报告基因(cel5G)重组表达质粒构建 | 第67页 |
| ·报告基因(cel5G)重组表达质粒与pAC共转化E.coli TOP10 | 第67页 |
| ·培养时间对质粒共存的影响 | 第67-68页 |
| ·转接培养对质粒共存的影响 | 第68-69页 |
| ·β-1,4-葡聚糖内切酶Ce15G与AraC在E.coli TOP10中的共表达及酶活分析 | 第69-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 4 本章小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第三章 基于乳糖操纵元调控元件及rrnB P1启动子的表达系统的构建及验证 | 第76-96页 |
| 1 材料与方法 | 第76-85页 |
| ·菌株与质粒 | 第76页 |
| ·培养基与试剂 | 第76页 |
| ·培养条件 | 第76-77页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第77-78页 |
| ·表达载体的构建 | 第78-83页 |
| ·报告基因(cel5G)系列表达系统的构建 | 第83-84页 |
| ·报告基因(barnase)系列表达系统的构建 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-93页 |
| ·表达载体的构建 | 第85-88页 |
| ·报告基因(cel5G)系列表达系统的构建 | 第88-89页 |
| ·β-1,4-葡聚糖内切酶Cel5G活力测定 | 第89-91页 |
| ·β-1,4-葡聚糖内切酶Cel5G在大肠杆菌不同宿主菌中的酶活力测定 | 第91-92页 |
| ·Barnase蛋白的表达 | 第92-93页 |
| 3 讨论 | 第93-94页 |
| 4 本章小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-96页 |
| 第四章 pRBB表达载体在定向进化中的应用 | 第96-118页 |
| 1 材料与方法 | 第97-104页 |
| ·菌株与质粒 | 第97-98页 |
| ·培养基与试剂 | 第98-99页 |
| ·质粒的提取 | 第99页 |
| ·突变文库的构建 | 第99-101页 |
| ·突变体文库的筛选 | 第101页 |
| ·突变体不同突变位点回复突变质粒的构建 | 第101-103页 |
| ·乙基对硫磷水解酶突变体活力分析 | 第103-104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-113页 |
| ·突变文库的构建 | 第104-105页 |
| ·乙基对硫磷水解酶失活的突变体的突变位点分析 | 第105-108页 |
| ·突变体不同突变位点回复突变质粒的构建 | 第108-111页 |
| ·乙基对硫磷水解酶回复突变体酶活力分析 | 第111-113页 |
| 3 讨论 | 第113-115页 |
| 4 本章小结 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-118页 |
| 全文总结与展望 | 第118-120页 |
| 主要创新点 | 第120-122页 |
| 附录 文中多用培养基、试剂及相关缓冲液配方 | 第122-126页 |
| 一 培养基 | 第122页 |
| 二 试剂 | 第122-126页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
