| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-28页 |
| 1 哈维弧菌生物学特性及致病机制 | 第11-16页 |
| ·哈维弧菌的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·哈维弧菌的流行病学 | 第13-14页 |
| ·哈维弧菌的感染途径 | 第14-15页 |
| ·哈维弧菌的致病机制 | 第15-16页 |
| 2 细菌致病子 | 第16-22页 |
| ·粘附相关因子 | 第16-17页 |
| ·毒力质粒及铁吸收系统 | 第17-19页 |
| ·溶血素 | 第19-20页 |
| ·次晶体表面蛋白层 | 第20-21页 |
| ·脂多糖 | 第21-22页 |
| ·外膜蛋白 | 第22页 |
| 3 外膜蛋白 | 第22-26页 |
| ·外膜蛋白的组成 | 第22-23页 |
| ·主要外膜蛋白 | 第23-24页 |
| ·OMP的致病机理 | 第24-25页 |
| ·OMP的免疫特性 | 第25-26页 |
| ·外膜蛋白的应用前景 | 第26页 |
| 4 本论文研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第2章 哈维弧菌(Vibrio harveyi)外膜蛋白OmpU的克隆、表达与免疫原性研究 | 第28-35页 |
| 1 前言 | 第28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-32页 |
| ·病原菌株、质粒和表达菌株 | 第28页 |
| ·分子生物学试剂 | 第28页 |
| ·哈维弧菌总DNA的提取及OmpU基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·表达质粒构建 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第30页 |
| ·大黄鱼的免疫和人工攻毒 | 第30-31页 |
| ·免疫与抗体的ELISA检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·OmpU的PCR克隆与原核表达载体的构建 | 第32页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·重组外膜蛋白对大黄鱼的免疫保护 | 第33-34页 |
| ·ELISA检测结果 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 第3章 两种弧菌外膜蛋白OmpW、OmpU基因的克隆和表达 | 第35-48页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·试剂与仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 3 实验结果分析 | 第41-46页 |
| ·OmpW、OmpU基因成熟肽编码序列的PCR克隆结果 | 第41-42页 |
| ·pET30(a)-OmpW、pET30(a)-OmpU原核表达质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·pET30(a)-OmpW,pET30(a)-OmpU的测序结果 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 4 结果与讨论 | 第46-48页 |
| ·OmpW,OmpU的成功克隆与表达 | 第46页 |
| ·鱼类病原菌外膜蛋白基因工程疫苗的研究 | 第46-48页 |
| 第4章 哈维弧菌外膜蛋白OmpW的真核表达 | 第48-58页 |
| 1 前言 | 第48-49页 |
| 2 材料和方法 | 第49-53页 |
| ·病原菌株、质粒和表达菌株 | 第49页 |
| ·分子生物学试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·OmpW的PCR扩增与表达质粒的构建 | 第49-51页 |
| ·重组质粒电转化入GS115宿主菌及阳性克隆的筛选 | 第51-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·OmpW扩增结果 | 第53页 |
| ·重组质粒pPIC9K-OmpW的PCR及酶切鉴定 | 第53-55页 |
| ·Mut+or Mut s表型筛选 | 第55-56页 |
| ·重组酵母细胞基因组DNA的PCR的筛选结果 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 1 总结 | 第58页 |
| 2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录1 | 第69-74页 |
| 附录2 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
