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茶尺蠖几丁质合成酶基因克隆及其双链干涉重组病毒毒力研究

致谢第1-11页
表格索引第11-12页
图片索引第12-14页
缩略语表第14-15页
摘要第15-17页
Abstract第17-19页
第一章 引言第19-33页
   ·虫害的生物防治第19-21页
     ·利用其他动物治虫第20页
     ·利用昆虫激素治虫第20页
     ·以病原微生物治虫第20-21页
   ·NPV病毒制剂的研究进展第21-22页
     ·整合外源基因的重组NPV病毒第21-22页
     ·改造内源基因的重组NPV病毒第22页
   ·RNAi技术的研究进展第22-25页
     ·RNAi的作用机制第22-23页
     ·RNAi技术的应用第23-25页
       ·RNAi技术在抗人体病毒研究中的应用第23-24页
       ·RNAi技术在肿瘤治疗研究中的应用第24页
       ·RNAi技术在植物研究中的应用第24页
       ·RNAi技术在昆虫研究中的应用第24-25页
   ·昆虫几丁质合成酶的研究进展第25-31页
     ·几丁质合成酶组织和细胞定位及主要特性第27-28页
       ·几丁质合成酶组织和细胞定位第27页
       ·昆虫几丁质合成酶主要特性第27-28页
     ·几丁质合成酶基因克隆研究第28页
     ·几丁质合成酶基因表达研究进展第28-31页
       ·几丁质合成酶基因组织特异性表达第28-29页
       ·几丁质合成酶基因发育阶段特异性表达第29-30页
       ·几丁质合成酶的调节第30-31页
   ·本研究背景及主要研究内容第31-33页
第二章 茶尺蠖几丁质合成酶CS基因的克隆第33-53页
   ·材料与方法第33-38页
     ·茶尺蠖第33页
     ·试剂第33页
     ·总RNA提取第33-34页
     ·茶尺蠖CS基因中间片断克隆第34页
       ·反转录合成一链cDNA第34页
       ·PCR克隆CS基因中间片断第34页
     ·RACE反应第34-36页
       ·3'RACE第35页
       ·5'RACE第35-36页
     ·目标基因片断克隆及测序第36-38页
       ·目标产物纯化第36-37页
       ·大肠杆菌感受态细胞制备第37页
       ·目标片段插入T载体第37页
       ·阳性克隆验证第37页
       ·序列拼接第37-38页
     ·CS基因表达分析第38页
   ·结果与分析第38-53页
     ·茶尺蠖CS基因的克隆第38-50页
       ·CS1全基因序列第39-49页
       ·茶尺蠖CS2部分基因序列克隆第49-50页
     ·茶尺蠖CS基因的表达分析第50-53页
第三章 包含CS基因双链干涉序列的重组病毒构建第53-72页
   ·材料与方法第53-58页
     ·实验材料及试剂第53页
     ·双链干涉中间载体构建第53-55页
       ·pMD18-T-CS~(1+/2+)质粒提取第54页
       ·CS基因片段正向插入pFGC5941中间载体第54-55页
       ·CS基因片段反向插入pFGC5941-CS第55页
       ·中间载体酶切和测序验证第55页
     ·双链干涉穿梭载体构建第55-56页
     ·外源CS双链干涉序列转化野生NPV DNA第56页
     ·重组病毒DNA转染sf9细胞第56-58页
       ·sf9细胞株培养第56-57页
       ·重组病毒DNA转染sf9细胞第57页
       ·重组病毒收集和验证第57-58页
       ·重组二代病毒的扩增第58页
     ·重组病毒对sf9细胞CS基因表达的影响第58页
   ·结果与分析第58-72页
     ·CS双链干涉载体构建第58-64页
     ·CS链干涉序列转化野生病毒第64-69页
     ·重组病毒繁殖和酶切验证第69-70页
     ·重组病毒对sf9细胞CS基因表达的影响第70-72页
第四章 重组病毒毒力评价第72-89页
   ·材料和方法第72-73页
     ·茶尺蠖、蚕和石榴尺蠖第72页
     ·注射病毒对茶尺蠖生长等的影响第72页
     ·饲喂病毒对茶尺蠖生长等的影响第72页
     ·重组病毒安全性评价第72-73页
       ·注射病毒对蚕生长发育的影响第72-73页
       ·饲喂病毒对蚕生长发育的影响第73页
       ·饲喂病毒对石榴尺蠖生长发育的影响第73页
   ·结果与分析第73-89页
     ·注射病毒对茶尺蠖生长等的影响第73-79页
     ·饲喂病毒对茶尺蠖生长等的影响第79-83页
     ·重组病毒的杀虫范围分析第83-89页
       ·注射病毒对蚕生长发育的影响第83-85页
       ·饲喂病毒对蚕生长发育的影响第85-87页
       ·重组病毒对石榴尺蠖生长的影响第87-89页
第五章 茶尺蠖部分生理功能基因克隆第89-103页
   ·材料与方法第89页
     ·茶尺蠖第89页
     ·试剂第89页
     ·茶尺蠖部分生理功能基因的克隆第89页
   ·结果与分析第89-103页
     ·茶尺蠖神经突触小泡蛋白基因svp克隆第89-91页
     ·茶尺蠖卵黄蛋白原基因vtg克隆第91-93页
     ·茶尺蠖基质金属蛋白酶基因片段克隆第93-94页
     ·茶尺蠖转座子tpa和反转录转座子rtp基因片段克隆第94-97页
     ·茶尺蠖乙醛脱氢酶基因adh片段克隆第97-98页
     ·茶尺蠖雷帕霉素靶蛋白tor基因第98-100页
     ·茶尺蠖自身抗原基因aag、18s RNA和28sRNA第100-103页
第六章 结论与展望第103-107页
   ·结论第103-105页
   ·展望和今后的研究方向第105-107页
参考文献第107-115页

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