| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 马传染性贫血病 | 第14-17页 |
| 1.1.1 马传染性贫血病概述 | 第14页 |
| 1.1.2 EIAV基因组结构及功能 | 第14-16页 |
| 1.1.3 EIAV感染临床特征及病理变化 | 第16-17页 |
| 1.2 EIAV感染诱导炎症反应的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.1 EIAV强毒和疫苗毒诱导的炎症反应 | 第17页 |
| 1.2.2 EIAV强毒和疫苗毒感染后脏器病理损伤 | 第17页 |
| 1.2.3 EIAV感染上调NLRP3和TLR3的mRNA水平 | 第17-18页 |
| 1.3 NLRP3 炎症小体研究进展 | 第18-25页 |
| 1.3.1 炎症小体概述 | 第18页 |
| 1.3.2 炎症小体分类 | 第18-20页 |
| 1.3.2.1 NLRs家族 | 第18-19页 |
| 1.3.2.2 AIM | 第19页 |
| 1.3.2.3 RIG-I | 第19-20页 |
| 1.3.3 NLRP3 活化的分子机制 | 第20-22页 |
| 1.3.3.1 ROS信号途径 | 第20页 |
| 1.3.3.2 溶酶体途径 | 第20-21页 |
| 1.3.3.3 细胞内钾离子外流途径 | 第21页 |
| 1.3.3.4 其他途径 | 第21-22页 |
| 1.3.4 NLRP3 活化的调控 | 第22-24页 |
| 1.3.4.1 参与NLRP3 炎症小体活化的分子 | 第22页 |
| 1.3.4.2 NLRP3 炎症小体活化的负调控 | 第22-24页 |
| 1.3.4.3 病毒感染与NLRP3 的活化 | 第24页 |
| 1.3.5 NLRP3 炎症小体激活的研究方法 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 马NLRP3 单抗及IL-1β和 capsae-1 多抗的制备 | 第26-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、细胞及实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.1.4 主要溶液和培养液配置 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 抗原表位预测 | 第29页 |
| 2.2.2 引物设计及目的基因扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 重组质粒构建 | 第30-31页 |
| 2.2.4 重组蛋白诱导表达及纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.5 动物免疫 | 第33页 |
| 2.2.5.1 制备单克隆抗体的小鼠免疫程序 | 第33页 |
| 2.2.5.2 制备多克隆抗体的兔免疫程序 | 第33页 |
| 2.2.6 血清抗体效价检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7 杂交瘤细胞融合 | 第34页 |
| 2.2.8 阳性杂交瘤细胞筛选及抗体亚型鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.9 小鼠腹水和兔血清抗体制备及纯化 | 第35页 |
| 2.2.10 抗体效价及反应性检测 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 目的基因扩增及重组质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.3.2 重组蛋白表达及纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.3 血清抗体效价检测 | 第38页 |
| 2.3.4 杂交瘤细胞筛选和抗体亚型鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.5 抗体纯化及效价检测 | 第39页 |
| 2.3.6 抗体反应性检测 | 第39-40页 |
| 2.4 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 NLRP3 炎症小体激活筛选系统的建立 | 第41-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.1 质粒、菌株及细胞 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养液配置 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 引物设计及质粒构建与表达 | 第41-43页 |
| 3.2.2 细胞活性检测 | 第43页 |
| 3.2.3 NLRP3 体外激活系统构建 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.3.1 质粒构建与表达 | 第44-45页 |
| 3.3.2 细胞活性检测 | 第45-46页 |
| 3.3.3 NLRP3 体外激活系统构建 | 第46-48页 |
| 3.3.4 NLRP3 体外激活系统验证 | 第48页 |
| 3.4 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 iGLuc报告系统在EIAV感染激活NLRP3 炎症小体中的应用 | 第49-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 质粒、毒株及细胞 | 第49页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.4 主要溶液和培养液配置 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 4.2.1 EIAV感染马单核巨噬细胞后炎症因子水平检测 | 第50页 |
| 4.2.2 马单核巨噬细胞感染EIAV后 caspase-1、IL-1β和 NLRP3 蛋白检测 | 第50-51页 |
| 4.2.3 iGLuc报告系统筛选激活NLRP3 炎症小体的病毒相关蛋白 | 第51页 |
| 4.2.4 EIAV 病毒蛋白激活 NLRP3 形成 ASC-斑点实验 | 第51页 |
| 4.2.5 EIAV 病毒蛋白与 NLRP3 的 PLA 实验 | 第51页 |
| 4.2.6 ELAV 病毒蛋白与 NLRP3 蛋白复合物 Co-IP 实验 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-57页 |
| 4.3.1 EIAV感染马单核巨噬细胞后炎症因子水平的变化趋势 | 第51-52页 |
| 4.3.2 马巨噬细胞感染EIAV后 caspase-1、IL-1β和 NLRP3 蛋白表达检测 | 第52-53页 |
| 4.3.3 应用iGLuc炎症小体激活系统筛选EIAV病毒蛋白 | 第53-55页 |
| 4.3.4 EIAV 病毒蛋白形成 ASC-斑点实验 | 第55页 |
| 4.3.5 ELAV 病毒蛋白与 NLRP3 蛋白的互作实验 | 第55-57页 |
| 4.4 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 全文讨论 | 第58-61页 |
| 第六章 全文结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
