| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第11-19页 |
| 1.1.1 脂肪酶简介 | 第11页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构特点 | 第11-13页 |
| 1.1.3 脂肪酶的性质研究 | 第13页 |
| 1.1.4 脂肪酶的应用研究 | 第13-19页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第19-22页 |
| 1.2.1 菌株及表达载体 | 第19-20页 |
| 1.2.2 外源基因的转化以及整合 | 第20-21页 |
| 1.2.3 影响外源蛋白在P.pastoris中高效表达的因素 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.4 试剂和酶 | 第24页 |
| 2.1.5 仪器和相关实验设备 | 第24-25页 |
| 2.1.6 实验主要常用溶液的配方及配制方法 | 第25-27页 |
| 2.1.7 引物 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-39页 |
| 2.2.1 LipA基因的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.2 表达载体pHBM905A-BDM的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3 毕赤酵母的转化及重组子的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.4 脂肪酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第32-35页 |
| 2.2.5 脂肪酶的纯化 | 第35页 |
| 2.2.6 脂肪酶的去N-糖基化处理 | 第35页 |
| 2.2.7 分光光度法测脂肪酶水解活力 | 第35-36页 |
| 2.2.8 脂肪酶的酶学性质分析 | 第36-37页 |
| 2.2.9 转酯反应 | 第37页 |
| 2.2.10 薄层色谱法(TLC)分析法 | 第37-39页 |
| 第3章 结果与分析 | 第39-51页 |
| 3.1 LipA毕赤酵母表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.2 pHBM905BDM-LipA的毕赤酵母转化及转化子的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3 LipA在毕赤酵母中的诱导表达及浓度测定 | 第42-44页 |
| 3.3.1 纯化目的蛋白 | 第43页 |
| 3.3.2 Western Blotting检测目的蛋白 | 第43-44页 |
| 3.3.3 去N-糖基化处理目的蛋白 | 第44页 |
| 3.4 重组脂肪酶的酶学性质研究 | 第44-50页 |
| 3.4.1 重组脂肪酶的底物特异性 | 第44-45页 |
| 3.4.2 pH对重组脂肪酶活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.3 温度对重组脂肪酶活性的影响 | 第46-48页 |
| 3.4.4 金属离子对重组脂肪酶活性的影响 | 第48页 |
| 3.4.5 去污剂对重组脂肪酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.6 有机溶剂对重组脂肪酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 转酯反应 | 第50-51页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
