| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1. 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 p53的简介 | 第10-13页 |
| 1.1.1 p53蛋白的功能结构域 | 第10页 |
| 1.1.2 p53蛋白的信号通路 | 第10-12页 |
| 1.1.3 p53蛋白的生物学功能 | 第12-13页 |
| 1.2 SRC-1简介 | 第13-18页 |
| 1.2.1 核受体简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 核受体辅调节因子 | 第14页 |
| 1.2.3 P160类固醇受体辅因子(SRC)基因家族 | 第14-15页 |
| 1.2.4 SRC-1结构与功能 | 第15-18页 |
| 1.3 泛素化途径 | 第18-22页 |
| 1.3.1 泛素化 | 第18-19页 |
| 1.3.2 p53与泛素化途径 | 第19-20页 |
| 1.3.3 SRCs与泛素化途径 | 第20-22页 |
| 1.4 研究的进展与意义 | 第22-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 常用试剂与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第25页 |
| 2.2.2 细胞常规培养 | 第25页 |
| 2.3 分子克隆相关方法 | 第25-33页 |
| 2.3.1 载体与质粒 | 第25-28页 |
| 2.3.2 质粒构建 | 第28-33页 |
| 2.4 融合蛋白的表达与纯化 | 第33-36页 |
| 2.4.1 融合蛋白的表达 | 第33页 |
| 2.4.2 融合蛋白的纯化 | 第33-35页 |
| 2.4.3 聚丙烯凝胶电泳 | 第35-36页 |
| 2.5 AlphaScreen分析实验 | 第36-37页 |
| 2.6 Pull-Down实验 | 第37-39页 |
| 2.7 免疫共沉淀Co-IP和蛋白印迹WB | 第39-43页 |
| 2.7.1 免疫共沉淀Co-IP | 第39-41页 |
| 2.7.2 Western Blot | 第41-43页 |
| 3. 结果与分析 | 第43-64页 |
| 3.1 肿瘤抑制因子p53及核受体辅激活因子SRC-1的片段截取 | 第43-44页 |
| 3.2 p53和SRC-1融合蛋白的表达与纯化 | 第44-48页 |
| 3.2.1 p53融合蛋白的表达与纯化 | 第44-46页 |
| 3.2.2 SRC-1融合蛋白的表达与纯化 | 第46-48页 |
| 3.3 p53和SRC-1体外相互作用的研究 | 第48-55页 |
| 3.3.1 Alphascreen分析实验检测蛋白相互作用 | 第49-50页 |
| 3.3.2 Pull Down实验检测蛋白相互作用 | 第50-51页 |
| 3.3.3 共表达纯化实验验证SRC-1与p53的相互作用 | 第51-55页 |
| 3.3.4 体外验证相互作用结果 | 第55页 |
| 3.4 过表达p53可抑制SRC-1 PAS表达 | 第55-57页 |
| 3.5 p53通过泛素化途径对SRC-1 PAS进行转录后调控 | 第57-60页 |
| 3.5.1 在阻断蛋白合成途径后,p53加速SRC-1 PAS降解 | 第57-58页 |
| 3.5.2 泛素化途径的阻断回调p53对SRC-1 PAS的抑制作用 | 第58-60页 |
| 3.6 Co-IP实验验证p53与SRC-1 PAS相互作用 | 第60-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
