| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 酿酒酵母 | 第10-11页 |
| 1.2 Nhp6 | 第11-14页 |
| 1.2.1 Nhp6能调节DNA的结构变化 | 第11页 |
| 1.2.2 Nhp6参与了基因的转录过程 | 第11-12页 |
| 1.2.3 Nhp6与多种染色体修饰有关 | 第12-14页 |
| 1.3 ELF1 | 第14-15页 |
| 1.3.1 ELF1的结构特征 | 第14页 |
| 1.3.2 ELF1参与基因的转录延伸过程 | 第14-15页 |
| 1.3.3 ELF1参与调控染色体的结构 | 第15页 |
| 1.4 基因敲除技术在真菌中的建立 | 第15-18页 |
| 1.5 Real-time PCR技术 | 第18-19页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 载体 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 GST、GST-Nhp6A和GST-Nhp6B表 达酵母Y258(p EGH)、nhp6a(+)和nhp6b(+)的制备 | 第22-25页 |
| 2.2.2 GST蛋白及GST-Nhp6A、GST-Nhp6B和GST-ELF1重组蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.3 缺失型酵母nhp6a(-)和nhp6b(-)的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 补救型酵母nhp6a(r)、nhp6b(r)的制备及验证 | 第27页 |
| 2.2.5 不同酵母的滴板生长实验 | 第27-28页 |
| 2.2.6 不同酵母的细胞生长曲线的测定 | 第28页 |
| 2.2.7 Real-time PCR检测在不同 酵母菌中ELF1蛋白的差异表达水平 | 第28-31页 |
| 第三章 结果 | 第31-46页 |
| 3.1 重组表达质粒pEGH-nhp6a和pEGH-nhp6b的构建 | 第31-33页 |
| 3.1.1 NHP6A、NHP6B基因的克隆 | 第31页 |
| 3.1.2 重组表达质粒pEGH-NHP6A和pEGH-NHP6B的构建及验证结果 | 第31-33页 |
| 3.2 GST、GST-Nhp6A和GST-Nhp6B蛋白的诱导表达及验证结果 | 第33-34页 |
| 3.3 GST、GST-Nhp6A、GST-Nhp6B和GST-ELF1蛋白的纯化结果 | 第34-36页 |
| 3.4 基因缺失型酵母nhp6a(-)、nhp6b(-)的制备与鉴定结果 | 第36-38页 |
| 3.5 补救型酵母nhp6a(r)、nhp6b(r)的制备与鉴定 | 第38-41页 |
| 3.6 Nhp6A和Nhp6B蛋白对酵母正常生长的检测结果 | 第41-43页 |
| 3.7 Real-time PCR检测在不同种酵母菌中ELF1蛋白的表达水平结果 | 第43-46页 |
| 3.7.1 内参基因ACT1和目的基因ELF1的PCR产物特异性和PCR的动力学特征的检测结果 | 第43-44页 |
| 3.7.2 Nhp6蛋白对ELF1蛋白表达量的影响 | 第44-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 在利用长侧翼中断法（LFH-PCR）制备基因缺失型酵母nhp6a(-)/nhp6b(-)时，基因两端的同源序列长度的确定 | 第46页 |
| 4.2 Nhp6蛋白的过表达对酵母的正常生长的影响 | 第46-47页 |
| 4.3 基因缺失型酵母nhp6a(-)和nhp6b(-)的生长状况的分析 | 第47页 |
| 4.4 Nhp6A蛋白对ELF1蛋白表达量的影响 | 第47-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
