| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 缩略词对照表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 非核糖体肽(NRPs)及其生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2 新型缩肽类抗生素teixobactin的研究进展 | 第17-23页 |
| 1.2.1 细菌产生耐药性的机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2 不可培养微生物用于新型抗生素挖掘 | 第18-19页 |
| 1.2.3 Teixobactin的化学结构和生物学活性 | 第19-20页 |
| 1.2.4 Teixobactin的作用机制 | 第20-21页 |
| 1.2.5 Teixobactin的化学全合成 | 第21-22页 |
| 1.2.6 Teixobactin的生物合成 | 第22-23页 |
| 1.3 Red/ET同源重组工程 | 第23-26页 |
| 1.3.1 Red/ET同源重组工程的原理 | 第24-25页 |
| 1.3.2 Red/ET同源重组工程的应用 | 第25-26页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 1.5 研究内容和技术路线 | 第27-30页 |
| 第二章 Teixobactin生物合成基因簇的人工合成和组装 | 第30-50页 |
| 2.1 研究背景 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-38页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第30-32页 |
| 2.2.2 培养基、抗生素和诱导剂 | 第32-33页 |
| 2.2.3 寡核苷酸链的合成与DNA测序 | 第33-35页 |
| 2.2.4 分子生物学试剂 | 第35-36页 |
| 2.2.5 生物信息分析软件及在线工具 | 第36-37页 |
| 2.2.6 仪器设备清单 | 第37-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.3.1 大肠杆菌的基础实验操作 | 第38-40页 |
| 2.3.2 ExoCET重组技术进行多片段组装 | 第40页 |
| 2.3.3 PCR扩增及菌落PCR | 第40-42页 |
| 2.4 实验结果 | 第42-48页 |
| 2.4.1 Teixobactin基因簇的生物信息学分析和研究方案的确定 | 第42-43页 |
| 2.4.2 Teixobactin表达质粒的组装 | 第43-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 Teixobactin生物合成基因簇的组合生物学重构 | 第50-58页 |
| 3.1 研究背景 | 第50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-52页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第50-51页 |
| 3.2.2 寡核苷酸链的合成与DNA测序 | 第51-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 3.3.1 双基因簇缝合 | 第52-53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.4.1 End基因簇的化学合成和组装 | 第53-54页 |
| 3.4.2 Teixobactin-End基因簇的缝合 | 第54-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 Teixobactin人工合成基因簇的异源表达 | 第58-78页 |
| 4.1 研究背景 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-63页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第58-60页 |
| 4.2.2 培养基、抗生素和诱导剂 | 第60-62页 |
| 4.2.3 分子生物学试剂 | 第62页 |
| 4.2.4 生物信息学分析软件及在线工具 | 第62页 |
| 4.2.5 仪器设备清单 | 第62-63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-69页 |
| 4.3.1 伯克氏菌和假单胞菌的基础实验操作 | 第63-65页 |
| 4.3.2 链霉菌的基础实验操作 | 第65-66页 |
| 4.3.3 添加接合转移和转座元件 | 第66-67页 |
| 4.3.4 表达产物的制备和纯化 | 第67-68页 |
| 4.3.5 表达产物抑菌活性检测 | 第68-69页 |
| 4.4 实验结果 | 第69-76页 |
| 4.4.1 Teixobactin基因簇在异源宿主中的整合和异源表达 | 第69-71页 |
| 4.4.2 End基因簇mppPQR在异源宿主中的整合和异源表达 | 第71-73页 |
| 4.4.3 Teixobactin-End杂合基因簇在异源宿主中的整合和异源表达 | 第73-75页 |
| 4.4.4 异源表达产物分离纯化及核磁分析 | 第75-76页 |
| 4.5 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 总结与展望 | 第78-82页 |
| 5.1 总结 | 第78-79页 |
| 5.2 创新性分析 | 第79页 |
| 5.3 展望 | 第79-82页 |
| 附录 | 第82-114页 |
| 参考文献 | 第114-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第122-123页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第123页 |
