| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 大豆花叶病毒 | 第12-16页 |
| 1.1 大豆花叶病毒的特性和基因组结构 | 第12-13页 |
| 1.2 大豆花叶病毒病的症状及危害 | 第13页 |
| 1.3 植物病毒的检测 | 第13-14页 |
| 1.3.1 免疫学检测方法 | 第14页 |
| 1.3.2 基于病毒外壳蛋白的检测方法 | 第14页 |
| 1.4 大豆花叶病毒的株系划分 | 第14-16页 |
| 2 植物抗病基因簇 | 第16-20页 |
| 2.1 基因簇 | 第16页 |
| 2.2 植物抗病基因 | 第16-19页 |
| 2.2.1 抗病基因的结构与分类 | 第17-18页 |
| 2.2.2 抗病基因的分类 | 第18-19页 |
| 2.3 抗病基因的研究进展 | 第19页 |
| 2.4 大豆抗大豆花叶病毒研究进展 | 第19-20页 |
| 3 病毒诱导的基因沉默 | 第20-27页 |
| 3.1 病毒诱导的基因沉默原理 | 第20-21页 |
| 3.2 VIGS技术的发展 | 第21-26页 |
| 3.2.1 VIGS载体种类及发展 | 第22-24页 |
| 3.2.2 VIGS技术的应用 | 第24-25页 |
| 3.2.3 VIGS技术的优势和局限 | 第25-26页 |
| 3.3 VIGS在大豆上的应用 | 第26-27页 |
| 4 本研究的内容及目的意义 | 第27-28页 |
| 第二章 Rsc4基因簇的克隆与生物信息学分析 | 第28-38页 |
| 1 材料与方法 | 第28-31页 |
| 1.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 1.1.2 克隆载体与转化菌株 | 第28页 |
| 1.1.3 主要生化试剂 | 第28页 |
| 1.1.4 引物设计及合成 | 第28-29页 |
| 1.2 试验方法 | 第29-31页 |
| 1.2.1 植物总RNA的提取 | 第29页 |
| 1.2.2 cDNA链的合成 | 第29页 |
| 1.2.3 大豆Rsc4基因簇的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 1.2.4 PCR产物的体外连接 | 第30页 |
| 1.2.5 大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第30-31页 |
| 1.2.6 大豆Rsc4基因簇的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.1 基因簇cDNA的克隆 | 第31-32页 |
| 2.2 Rsc4基因的序列分析及编码蛋白的结构功能预测 | 第32-35页 |
| 3 讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 大豆抗大豆花叶病毒候选基因簇的QRT-PCR分析 | 第38-44页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.1.1 植物材料和病毒株系 | 第38-39页 |
| 1.1.2 主要生化试剂 | 第39页 |
| 1.1.3 引物设计及合成 | 第39页 |
| 1.1.4 溶液及培养基的配制 | 第39页 |
| 1.2 试验方法 | 第39-41页 |
| 1.2.1 SMV接种及采样 | 第39页 |
| 1.2.2 植物总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 1.2.3 cDNA的合成 | 第40页 |
| 1.2.4 QRT-PCR | 第40-41页 |
| 1.2.5 数据分析 | 第41页 |
| 2 结果与讨论 | 第41-44页 |
| 2.1 候选基因Rsc4的表达分析 | 第41页 |
| 2.2 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 利用BPMV介导的VIGS体系分析Rsc4候选基因簇的功能 | 第44-58页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 1.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 植物材料和病毒株系 | 第44页 |
| 1.1.2 VIGS载体与转化菌株 | 第44-45页 |
| 1.1.3 主要生化试剂 | 第45页 |
| 1.1.4 引物设计及合成 | 第45页 |
| 1.1.5 溶液及培养基的配制 | 第45页 |
| 1.2 试验方法 | 第45-49页 |
| 1.2.1 VIGS载体的构建 | 第45-47页 |
| 1.2.2 pGG7R1和pGG7R2-Rsc4的线性化 | 第47页 |
| 1.2.3 重组沉默载体的体外转录与侵染 | 第47-48页 |
| 1.2.4 血清学鉴定 | 第48页 |
| 1.2.5 沉默载体在抗感品种上的侵染及QRT-PCR | 第48-49页 |
| 1.2.6 Rsc4基因簇沉默后大白麻对SMV-SC4的抗感表型分析及SMV检测 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-56页 |
| 2.1 重组沉默载体的验证 | 第49-51页 |
| 2.2 BPMV-Rsc4体外转录与侵染的检测 | 第51-53页 |
| 2.3 Rsc4基因簇沉默后大白麻对SMV-SC4的抗性分析 | 第53-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 全文结论与创新点 | 第58-60页 |
| 全文结论 | 第58-59页 |
| 本文创新点 | 第59页 |
| 展望 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
