| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第8-22页 |
| 1.1 小RNA简介 | 第8-13页 |
| 1.1.1 RNA的种类与功能 | 第8-9页 |
| 1.1.2 细菌小RNA简介 | 第9-11页 |
| 1.1.3 细菌小RNA的调控机理 | 第11-13页 |
| 1.2 小RNA功能研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 高通量测序简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 鉴定细菌小RNA功能的方法 | 第14-17页 |
| 1.3 黄单胞菌小RNA研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 黄单胞菌属简介 | 第17-19页 |
| 1.3.2 黄单胞菌小RNA的研究状况 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的主要目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 供试菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.2 引物 | 第23-24页 |
| 2.3 本实验所用的抗生素 | 第24-25页 |
| 2.4 培养基、菌株培养和菌种保藏 | 第25-26页 |
| 2.4.1 培养基 | 第25页 |
| 2.4.2 培养条件 | 第25-26页 |
| 2.4.3 菌种保藏 | 第26页 |
| 2.5 常用溶液 | 第26-29页 |
| 2.6 细菌总DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.7 质粒的提取(快速碱裂解法) | 第30页 |
| 2.8 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.9 PCR扩增 | 第30-32页 |
| 2.9.1 PCR引物的设计 | 第30-31页 |
| 2.9.2 模板的制备 | 第31页 |
| 2.9.3 PCR反应体系 | 第31页 |
| 2.9.4 PCR反应条件 | 第31-32页 |
| 2.10 DNA酶切 | 第32页 |
| 2.11 DNA片段纯化 | 第32页 |
| 2.12 DNA连接 | 第32-33页 |
| 2.13 大肠杆菌大肠杆菌电脉冲感受细胞的制备 | 第33页 |
| 2.14 大肠杆菌电转化 | 第33页 |
| 2.15 三亲本接合 | 第33-34页 |
| 2.16 DNA测序 | 第34页 |
| 2.17 细菌总RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.17.1 提取总RNA前的准备及注意事项 | 第34-35页 |
| 2.17.2 Trizol提取总RNA | 第35页 |
| 2.18 RNA的定量与纯度 | 第35-36页 |
| 2.19 Northern杂交 | 第36-39页 |
| 2.19.1 准备工作 | 第36页 |
| 2.19.2 RNA的聚丙烯酰胺凝胶分离 | 第36-37页 |
| 2.19.3 电转移 | 第37页 |
| 2.19.4 预杂交和杂交 | 第37-38页 |
| 2.19.5 洗膜 | 第38页 |
| 2.19.6 Northern Blot显影 | 第38-39页 |
| 2.20 过量表达菌株的构建 | 第39页 |
| 2.21 缺失突变体菌株的构建 | 第39-40页 |
| 2.22 植株致病性实验 | 第40页 |
| 2.23 过敏性反应实验 | 第40页 |
| 2.24 营养缺陷型检测 | 第40-41页 |
| 2.25 胞外多糖的检测 | 第41页 |
| 2.26 胞外酶的平板检测 | 第41-42页 |
| 2.27 生物膜形成检测 | 第42页 |
| 2.28 游动性检测 | 第42页 |
| 2.29 金属敏感性检测 | 第42-43页 |
| 第三章 实验过程和结果 | 第43-62页 |
| 3.1 技术路线 | 第43-53页 |
| 3.1.1 小RNA基因过量表达菌株的构建 | 第43-48页 |
| 3.1.2 小RNA缺失突变体的构建 | 第48-53页 |
| 3.2 过量表达菌株OE19等和缺失突变体DM19的表型分析 | 第53-62页 |
| 3.2.1 sRNA-Xcc基因的过量表达或缺失对Xcc在基本培养基中生长的影响 | 第53-55页 |
| 3.2.2 sRNA-Xcc基因的过量表达或缺失对Xcc对Zn~(2+)、Cu~(2+)、Mn~(2+)、Co~(2+)、Cd~(2+)、Ni~(2+)的耐受能力的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.3 sRNA-Xcc基因的过量表达或缺失对Xcc对和SDS和H_2O_2的耐受能力的影响 | 第56-58页 |
| 3.2.4 sRNA-Xcc基因的过量表达或缺失对Xcc胞外多糖产量和胞外酶活性的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.5 sRNA-Xcc基因的过量表达或缺失对Xcc的游动性和生物膜形成的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.6 sRNA-Xcc基因的过量表达或缺失对Xcc在寄主植物萝卜上的致病力和在非寄主植物辣椒上的HR反应的影响 | 第60-62页 |
| 3.3 总结 | 第62页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第62-71页 |
| 4.1 六个小RNA的生物信息学分析 | 第62-68页 |
| 4.2 对sRNA-Xcc23的过量表达引起的表型变化的分析 | 第68-69页 |
| 4.3 对sRNA-Xcc24的过量表达引起的表型变化的分析 | 第69页 |
| 4.4 六个小RNA功能鉴定的后续工作 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
