| 缩写词 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-17页 |
| Abstract | 第17-23页 |
| 第一章 引言 | 第24-37页 |
| 1 文心兰产业的发展现况与未来需要 | 第25-27页 |
| 1.1 文心兰的销售现况 | 第25-26页 |
| 1.2 文心兰的产业需求 | 第26-27页 |
| 2 植物雄性不育的现象 | 第27-31页 |
| 2.1 植物雄性不育的表现及鉴定方法 | 第27-28页 |
| 2.2 花粉败育的细胞学研究进展 | 第28-29页 |
| 2.3 文心兰花粉败育的研究进展 | 第29-31页 |
| 2.3.1 花粉萌芽活力低 | 第29-30页 |
| 2.3.2 自交不亲和性 | 第30页 |
| 2.3.3 染色体不易配对 | 第30-31页 |
| 3 转录组测序发展及应用 | 第31-33页 |
| 3.1 转录组测序技术的发展 | 第31-32页 |
| 3.2 转录组测序在植物雄性不育上的利用研究 | 第32-33页 |
| 4 花粉败育分子机制的研究进展 | 第33-36页 |
| 4.1 花粉母细胞减数分裂相关基因 | 第33-34页 |
| 4.2 与花药和花粉发育相关的MYB转录因子 | 第34-36页 |
| 5 本研究的意义及主要内容 | 第36-37页 |
| 5.1 研究意义 | 第36页 |
| 5.2 主要内容 | 第36-37页 |
| 第二章 文心兰花粉的细胞形态学观察 | 第37-44页 |
| 1 材料与方法 | 第37-38页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.2 方法 | 第37-38页 |
| 1.2.1 花粉团的解剖显微镜观察和扫描电镜观察 | 第37-38页 |
| 1.2.2 花粉粒的扫描电镜观察 | 第38页 |
| 1.2.3 花粉母细胞的显微镜观察 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-42页 |
| 2.1 花粉团形态观察 | 第38-39页 |
| 2.2 花粉粒形态观察 | 第39-40页 |
| 2.3 花粉母细胞的DAPI染色结果 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 3.1 '柠檬绿'花粉败育特征分析 | 第42页 |
| 3.2 '柠檬绿'花粉母细胞减数分裂异常 | 第42-44页 |
| 第三章 文心兰和堇花兰花粉团部位的转录组分析 | 第44-70页 |
| 1 材料与方法 | 第44-50页 |
| 1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.2 方法 | 第45-50页 |
| 1.2.1 RNA的提取及cDNA逆转录 | 第45页 |
| 1.2.2 测序文库的构建及质量控制 | 第45-46页 |
| 1.2.3 Illmunina测序及测序质量评估 | 第46-47页 |
| 1.2.4 测序数据过滤及生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 1.2.5 文心兰花粉发育相关基因的筛选与聚类分析 | 第48-49页 |
| 1.2.6 差异表达基因的qRT-PCR验证 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-67页 |
| 2.1 RNA样品及测序文库的品质检测结果 | 第50-51页 |
| 2.2 转录组测序结果分析 | 第51-59页 |
| 2.2.1 原始数据的过滤及质量评估 | 第51-54页 |
| 2.2.2 de novo组装 | 第54-55页 |
| 2.2.3 Unigene的功能注释与分析 | 第55-59页 |
| 2.2.3.1 GO分类 | 第56-58页 |
| 2.2.3.2 KEGG分类 | 第58-59页 |
| 2.3 差异表达基因的筛选 | 第59-67页 |
| 2.3.1 差异表达基因的GO富集分析 | 第61页 |
| 2.3.2 差异表达基因的Pathway显著性富集分析 | 第61-63页 |
| 2.3.3 文心兰花粉发育相关基因的筛选 | 第63-65页 |
| 2.3.4 文心兰花粉发育相关差异表达基因的qRT-PCR验证 | 第65-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 3.1 转录组数据库的构建评价及利用转录组研究花粉败育的可行性分析 | 第67页 |
| 3.2 差异表达基因的功能分析 | 第67-68页 |
| 3.3 花粉发育相关差异表达基因的挖掘 | 第68-70页 |
| 第四章 文心兰OnMAD2基因的克隆、生物信息学及表达分析 | 第70-87页 |
| 第一节 文心兰OnMAD2基因的克隆 | 第70-76页 |
| 1 材料与方法 | 第71-72页 |
| 1.1 材料 | 第71页 |
| 1.2 方法 | 第71-72页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA逆转录 | 第71页 |
| 1.2.2 文心兰DNA的提取 | 第71页 |
| 1.2.3 文心兰OnMAD2基因cDNA全长序列的克隆及序列分析 | 第71-72页 |
| 1.2.4 文心兰OnMAD2基因gDNA序列的扩增 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-75页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取及质量检测 | 第72页 |
| 2.2 文心兰OnMAD2基因开放阅读框克隆 | 第72-73页 |
| 2.3 文心兰OnMAD2基因的同源性分析 | 第73-75页 |
| 2.3.1 文心兰OnMAD2基因的核苷酸序列分析 | 第73-74页 |
| 2.3.2 文心兰OnMAD2基因编码的氨基酸序列分析 | 第74-75页 |
| 2.4 文心兰gDNA序列的克隆与分析 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 第二节 文心兰OnMAD2的生物信息学分析 | 第76-83页 |
| 1 材料与方法 | 第76-77页 |
| 1.1 材料 | 第76页 |
| 1.2 方法 | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-82页 |
| 2.1 OnMAD2蛋白理化性质预测和分析 | 第77页 |
| 2.2 OnMAD2信号肽及亚细胞定位预测 | 第77-78页 |
| 2.3 OnMAD2二级结构和三级结构预测 | 第78-79页 |
| 2.4 OnMAD2保守结构域预测 | 第79-80页 |
| 2.5 OnMAD2系统进化树分析 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 第三节 文心兰OnMAD2基因的表达模式分析 | 第83-87页 |
| 1 材料与方法 | 第83-85页 |
| 1.1 材料 | 第83-84页 |
| 1.2 方法 | 第84-85页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA逆转录 | 第84页 |
| 1.2.2 qRT-PCR分析 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-86页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取及质量检测 | 第85页 |
| 2.2 OnMAD2在文心兰'柠檬绿'不同组织器官中的表达模式分析 | 第85页 |
| 2.3 OnMAD2在文心兰'柠檬绿'不同花期中的表达模式分析 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-87页 |
| 第五章 文心兰OnMYB106基因的克隆、生物信息学及表达分析 | 第87-103页 |
| 第一节 文心兰OnMYB106基因的克隆 | 第87-92页 |
| 1 材料与方法 | 第87-88页 |
| 1.1 材料 | 第87页 |
| 1.2 方法 | 第87-88页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA逆转录 | 第87-88页 |
| 1.2.2 文心兰DNA的提取 | 第88页 |
| 1.2.3 文心兰OnMYB106基因cDNA全长序列的克隆 | 第88页 |
| 1.2.4 文心兰OnMYB106基因gDNA序列的扩增 | 第88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-91页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取及质量检测 | 第88页 |
| 2.2 文心兰OnMYB106基因开放阅读框克隆 | 第88-89页 |
| 2.3 文心兰OnMYB106基因的相似性分析 | 第89-91页 |
| 2.3.1 文心兰OnMYB106基因的核苷酸序列分析 | 第89-90页 |
| 2.3.2 文心兰OnMYB106基因的氨基酸序列分析 | 第90-91页 |
| 2.4 文心兰gDNA序列的克隆与分析 | 第91页 |
| 3 讨论 | 第91-92页 |
| 第二节 文心兰OnMYB106的生物信息学分析 | 第92-99页 |
| 1 材料与方法 | 第92页 |
| 1.1 材料 | 第92页 |
| 1.2 方法 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-98页 |
| 2.1 OnMYB106蛋白理化性质预测和分析 | 第92-93页 |
| 2.2 OnMYB106信号肽及亚细胞定位预测 | 第93-94页 |
| 2.3 OnMYB106二级结构和三级结构预测 | 第94-95页 |
| 2.4 OnMYB106保守结构域预测 | 第95-96页 |
| 2.5 不同植物R2R3-MYB蛋白基序结构分析 | 第96-97页 |
| 2.6 OnMYB106系统进化树分析 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-99页 |
| 第三节 文心兰OnMYB106基因的表达模式分析 | 第99-103页 |
| 1 材料与方法 | 第100页 |
| 1.1 材料 | 第100页 |
| 1.2 方法 | 第100页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA及cDNA逆转录 | 第100页 |
| 1.2.2 qRT-PCR分析 | 第100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-102页 |
| 2.1 文心兰总RNA的提取及质量检测 | 第100页 |
| 2.2 OnMYB106在文心兰'柠檬绿'不同组织器官中的表达模式分析 | 第100-101页 |
| 2.3 OnMYB106在文心兰'柠檬绿'不同花期中的表达模式分析 | 第101-102页 |
| 3 讨论 | 第102-103页 |
| 第六章 文心兰OnMAD2和OnMYB106过表达载体的构建及瞬时转化 | 第103-113页 |
| 1 材料与方法 | 第103-108页 |
| 1.1 材料 | 第103-104页 |
| 1.1.1 受体材料 | 第103页 |
| 1.1.2 质粒和菌株 | 第103-104页 |
| 1.2 方法 | 第104-108页 |
| 1.2.1 文心兰总RNA的提取及cDNA逆转录 | 第104页 |
| 1.2.2 序列的酶切位点分析 | 第104页 |
| 1.2.3 引物设计及瞬时表达载体的构建 | 第104-105页 |
| 1.2.4 重组质粒转化农杆菌 | 第105-106页 |
| 1.2.5 农杆菌侵染液的制备及转化 | 第106页 |
| 1.2.6 转基因文心兰PLBs的DNA水平检测 | 第106-107页 |
| 1.2.7 转基因文心兰PLBs的qRT-PCR检测 | 第107-108页 |
| 2 结果与分析 | 第108-111页 |
| 2.1 植物表达载体的构建及重组质粒的鉴定 | 第108-109页 |
| 2.2 转基因PLBs的DNA水平检测 | 第109页 |
| 2.3 GUS基因的瞬时表达分析 | 第109-110页 |
| 2.4 OnMAD2与OnMYB106基因的瞬时表达分析 | 第110-111页 |
| 3 讨论 | 第111-113页 |
| 3.1 文心兰OnMAD2功能探讨 | 第111-112页 |
| 3.2 文心兰OnMYB106转录因子功能探讨 | 第112-113页 |
| 第七章 结论与展望 | 第113-118页 |
| 1 结论 | 第113-116页 |
| 1.1 '柠檬绿'花粉壁发育异常 | 第113页 |
| 1.2 '柠檬绿'花粉母细胞减数分裂过程中染色体未正确分离 | 第113-114页 |
| 1.3 文心兰与堇花兰花粉转录组测序比较分析 | 第114-115页 |
| 1.3.1 转录组数据的获得 | 第114页 |
| 1.3.2 文心兰花粉发育相关基因的筛选 | 第114页 |
| 1.3.3 转录组数据库的验证 | 第114-115页 |
| 1.4 文心兰OnMAD2基因的克隆、生物信息学及定量表达分析 | 第115页 |
| 1.5 文心兰OnMYB106基因的克隆、生物信息学及定量表达分析 | 第115-116页 |
| 1.6 OnMAD2与OnMYB106过表达载体的构建及其在文心兰PLBs中的瞬时表达 | 第116页 |
| 2 展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 在学硕士期间发表学术论文情况 | 第129-130页 |
| 附录A 文心兰OnMAD2与OnMYB106基因的cDNA序列 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
