| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 主要英文缩略词对照表 | 第11-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 非洲爪蛙早期发育简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 非洲爪蛙生活史简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 中胚层诱导和背腹体轴的建立 | 第13-15页 |
| 1.2 神经系统发育简介 | 第15-18页 |
| 1.2.1 神经系统的诱导 | 第15-16页 |
| 1.2.2 神经系统的分化 | 第16-18页 |
| 1.3 神经系统发育过程中表观遗传学调控的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 DNA甲基化 | 第18-20页 |
| 1.3.2 组蛋白修饰 | 第20页 |
| 1.3.3 非编码RNA | 第20-21页 |
| 1.3.4 染色质的重塑 | 第21页 |
| 1.4 KDM3A的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.4.1 KDM3A的结构 | 第21-22页 |
| 1.4.2 KDM3A的功能 | 第22-23页 |
| 1.5 bHLH家族转录因子的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5.1 Neurog2研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5.2 Ascl1研究进展 | 第24页 |
| 1.6 论文研究目的 | 第24-26页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第26-54页 |
| 2.1 Morpholino寡核苷酸、引物、抗体、质粒 | 第26页 |
| 2.1.1 Morpholino寡核苷酸 | 第26页 |
| 2.1.2 引物 | 第26页 |
| 2.1.3 抗体 | 第26页 |
| 2.1.4 质粒 | 第26页 |
| 2.2 实验试剂、耗材、溶液 | 第26-38页 |
| 2.2.1 非洲爪蛙饲养材料 | 第26-27页 |
| 2.2.2 非洲爪蛙胚胎的体外受精与胚胎注射实验试剂、材料、溶液 | 第27-29页 |
| 2.2.3 动物极帽分离诱导实验材料、溶液 | 第29-30页 |
| 2.2.4 全胚胎原位杂交和β-半乳糖苷酶显色实验溶液 | 第30-32页 |
| 2.2.5 分子克隆实验试剂、溶液 | 第32页 |
| 2.2.6 质粒提取实验溶液 | 第32-33页 |
| 2.2.7 体外转录mRNA实验试剂、溶液 | 第33-34页 |
| 2.2.8 体外转录地高辛标记探针实验试剂 | 第34页 |
| 2.2.9 总RNA提取和反转录实验试剂、溶液 | 第34-35页 |
| 2.2.10 荧光实时定量PCR实验试剂、耗材 | 第35页 |
| 2.2.11 Western Blotting实验溶液 | 第35-37页 |
| 2.2.12 免疫共沉淀实验溶液 | 第37页 |
| 2.2.13 染色质免疫共沉淀实验溶液 | 第37-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-54页 |
| 2.3.1 非洲爪蛙的饲养 | 第38页 |
| 2.3.2 非洲爪蛙胚胎的体外受精与胚胎注射 | 第38-39页 |
| 2.3.3 动物极帽分离诱导实验 | 第39页 |
| 2.3.4 全胚胎原位杂交实验 | 第39-41页 |
| 2.3.5 β-半乳糖苷酶显色实验 | 第41页 |
| 2.3.6 分子克隆 | 第41-42页 |
| 2.3.7 质粒提取 | 第42-43页 |
| 2.3.8 体外转录mRNA | 第43-46页 |
| 2.3.9 体外转录地高辛标记的探针 | 第46-47页 |
| 2.3.10 总RNA提取和反转录 | 第47-48页 |
| 2.3.11 荧光实时定量PCR | 第48-49页 |
| 2.3.12 Western Blotting实验 | 第49-50页 |
| 2.3.13 免疫共沉淀实验 | 第50-51页 |
| 2.3.14 染色质免疫共沉淀实验 | 第51-54页 |
| 第3章 KDM3A在非洲爪蛙早期胚胎中的表达图谱分析 | 第54-58页 |
| 3.1 kdm3a mRNA在非洲爪蛙早期胚胎发育中的总体表达水平 | 第54-55页 |
| 3.2 kdm3a mRNA在非洲爪蛙早期胚胎发育中的表达位置分析 | 第55页 |
| 3.3 KDM3A蛋白在非洲爪蛙胚胎早期发育中的总体表达水平 | 第55-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 第4章 敲低KDM3A导致非洲爪蛙神经系统分化缺陷 | 第58-72页 |
| 4.1 验证KDM3A MO的有效性 | 第58页 |
| 4.2 验证KDM3A MO的特异性 | 第58-60页 |
| 4.3 验证KDM3A MO2的有效性 | 第60-62页 |
| 4.4 验证KDM3A MO2的特异性 | 第62-63页 |
| 4.5 敲低KDM3A影响神经分化相关分子标记基因的表达 | 第63-64页 |
| 4.6 敲低KDM3A不影响外胚层的命运决定和神经诱导信号的功能 | 第64-67页 |
| 4.7 敲低KDM3A不影响中胚层的命运决定和对中内胚层诱导信号响应性.. | 第67-69页 |
| 4.8 敲低KDM3A不影响胚胎前后体轴的建立 | 第69-70页 |
| 4.9 敲低KDM3A干扰非洲爪蛙眼睛的发育 | 第70页 |
| 4.10 讨论 | 第70-71页 |
| 4.11 小结 | 第71-72页 |
| 第5章 bHLH转录因子诱导神经元分化需要KDM3A参与 | 第72-82页 |
| 5.1 Ngnr1在敲低KDM3A的胚胎中失去诱导神经元基因表达的活性 | 第72-74页 |
| 5.2 Ngnr1在敲低KDM3A的动物极帽中失去诱导神经元基因表达的活性 | 第74-75页 |
| 5.3 Ngn1、Ngn3、mNgn2在敲低KDM3A的胚胎中失去诱导神经元基因表达的活性 | 第75-78页 |
| 5.4 Ascl1在敲低KDM3A的胚胎中可以诱导神经元基因表达 | 第78-79页 |
| 5.5 Ascl1在敲低KDM3A的动物极帽中可以诱导神经元基因表达 | 第79-80页 |
| 5.6 敲低KDM3A后Ngnr1不能上调其靶基因启动子区域组蛋白激活型标记 | 第80页 |
| 5.7 讨论 | 第80-81页 |
| 5.8 小结 | 第81-82页 |
| 第6章 FGF信号诱导神经系统发育需要KDM3A参与 | 第82-87页 |
| 6.1 敲低KDM3A不影响FGF信号通路的激活 | 第82-83页 |
| 6.2 FGF信号在敲低KDM3A的胚胎中失去诱导神经元基因表达的活性 | 第83-84页 |
| 6.3 FGF信号在敲低KDM3A的动物极帽中失去诱导神经元基因表达的活性 | 第84-85页 |
| 6.4 讨论 | 第85-86页 |
| 6.5 小结 | 第86-87页 |
| 第7章 KDM3A与Ngnr1有相互作用 | 第87-94页 |
| 7.1 KDM3A与Ngnr1有相互作用 | 第87-88页 |
| 7.2 Ngnr1蛋白的C端与KDM3A蛋白有相互作用 | 第88-90页 |
| 7.3 KDM3A蛋白的N端与Ngnr1蛋白有相互作用 | 第90-91页 |
| 7.4 KDM3A和Ngnr1协同调控神经元分化 | 第91-92页 |
| 7.5 讨论 | 第92-93页 |
| 7.6 小结 | 第93-94页 |
| 第8章 Ngnr1和Ascl1转录活性的差异 | 第94-98页 |
| 8.1 Ngnr1能诱导neurod1表达,Ascl1不能 | 第94-95页 |
| 8.2 敲低合子Ascl1对neurod1表达影响不大 | 第95-96页 |
| 8.3 讨论 | 第96页 |
| 8.4 小结 | 第96-98页 |
| 第9章 Ngnr1招募KDM3A到Neurod1启动子区域 | 第98-109页 |
| 9.1 Ngnr1和Ascl1都可以结合在Neurod1启动子区域 | 第98-99页 |
| 9.2 过量表达Ngnr1能够招募KDM3A到Neurod1启动子区域 | 第99-101页 |
| 9.3 过量表达Ngnr1能够去除Neurod1启动子区域H3K9me2水平 | 第101-104页 |
| 9.4 敲低Ngnr1下调Neurod1启动子区域KDM3A蛋白水平 | 第104页 |
| 9.5 敲低Ngnr1上调Neurod1启动子区域H3K9me2水平 | 第104-105页 |
| 9.6 敲低合子Ascl1不改变Neurod1启动子区域H3K9me2水平 | 第105-107页 |
| 9.7 讨论 | 第107-108页 |
| 9.8 小结 | 第108-109页 |
| 第10章 Ngnr1对其靶基因启动子区域的结合受到KDM3A调控 | 第109-119页 |
| 10.1 过量表达kdm3a不改变神经元分化分子标记基因的表达水平 | 第109页 |
| 10.2 过量表达kdm3a在细胞质和染色质两个层面下调H3K9me2水平 | 第109-113页 |
| 10.3 过量表达kdm3a不改变神经元基因启动子区域H3K27ac水平 | 第113页 |
| 10.4 敲低KDM3A上调H3K9me2水平 | 第113-117页 |
| 10.5 敲低KDM3A影响Ngnr1在其靶基因启动子区域的结合 | 第117页 |
| 10.6 讨论 | 第117-118页 |
| 10.7 小结 | 第118-119页 |
| 第11章 总结与展望 | 第119-125页 |
| 11.1 论文结论 | 第119-120页 |
| 11.2 论文讨论 | 第120-124页 |
| 11.2.1 KDM3A受到Ngnr1的招募 | 第120-121页 |
| 11.2.2 Ngnr1与Ascl1的差异性 | 第121-122页 |
| 11.2.3 H3K9me2调控Ngnr1的招募 | 第122页 |
| 11.2.4 KDM3A的另一个功能 | 第122-123页 |
| 11.2.5 H3K9me2与H3K9me3 | 第123-124页 |
| 11.3 论文展望 | 第124-125页 |
| 11.3.1 KDM3A在神经元发育中功能是否具有保守性 | 第124页 |
| 11.3.2 进一步探究Ngnr1和Ascl1的相同点和不同点 | 第124页 |
| 11.3.3 母源KDM3A是否有功能 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第137页 |
