| 缩略词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 狐源致病性肺炎大肠杆菌概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 细菌病原学和流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 大肠杆菌抗原结构 | 第13-14页 |
| 1.1.3 肠外致病性大肠杆菌毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.2 HtrA蛋白概述 | 第15-20页 |
| 1.2.1 HtrA蛋白的功能和结构 | 第16-19页 |
| 1.2.2 大肠杆菌HtrA蛋白(DegP)的概述 | 第19-20页 |
| 1.3 λ-Red同源重组系统概述 | 第20-22页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 狐源致病性大肠杆菌HtrA蛋白原核表达及免疫保护力研究 | 第24-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 试验菌株、质粒及试验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 酶及其他试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 培养基及试剂配制 | 第24-26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 htra基因序列分析 | 第26页 |
| 2.2.2 pET-32a-htra表达载体的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3 重组His-HtrA蛋白的原核表达及验证 | 第29-30页 |
| 2.2.4 重组His-HtrA蛋白的可溶性分析及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 多抗血清识别重组His-HtrA蛋白效果验证 | 第31页 |
| 2.2.6 重组His-HtrA蛋白免疫保护试验 | 第31页 |
| 2.2.7 免疫小鼠血清抗体水平的检测 | 第31-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-38页 |
| 2.3.1 htra基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.2 原核表达载体pET-32a-htra的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组His-HtrA蛋白的原核表达及验证 | 第34-35页 |
| 2.3.4 重组His-HtrA蛋白的可溶性分析及纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.5 多抗血清识别重组His-HtrA蛋白效果验证 | 第36-37页 |
| 2.3.6 重组His-HtrA蛋白免疫保护力试验 | 第37页 |
| 2.3.7 免疫小鼠血清抗体水平的检测结果 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论与分析 | 第38-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 狐源致病性大肠杆菌htra基因缺失株的构建 | 第40-51页 |
| 3.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 试验菌株及质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 主要酶及试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 培养基及试剂配制 | 第40-41页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 试验菌株的筛选 | 第41页 |
| 3.2.2 试验所用pKD3、pKD46、pCP20、pBR322质粒的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.3 λ-Red同源重组引物的设计 | 第42页 |
| 3.2.4 扩增氯霉素抗性基因(Cat)片段 | 第42-43页 |
| 3.2.5 致病性大肠杆菌感受态细胞的制备及pKD46质粒的电转 | 第43页 |
| 3.2.6 CLE-1/pKD46感受态的制备及Cm+抗性片段的电转 | 第43-44页 |
| 3.2.7 消除CLE-1/pKD46::Cat菌株中的温度敏感性pKD46质粒 | 第44页 |
| 3.2.8 pCP20质粒的介导与缺失株的构建 | 第44-45页 |
| 3.3 CLE-1Δhtra回补株的构建 | 第45页 |
| 3.3.1 回补菌株表达载体pBR322-htra的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 重组载体pBR322-htra转入CLE-1Δhtra基因缺失株中 | 第45页 |
| 3.4 用Westernblot方法检测基因缺失及回补效果 | 第45-46页 |
| 3.5 结果 | 第46-49页 |
| 3.5.1 无耐药性菌株的筛选 | 第46页 |
| 3.5.2 大肠杆菌htra基因缺失株的构建 | 第46-47页 |
| 3.5.3 CLE-1Δhtra回补株的构建 | 第47-48页 |
| 3.5.4 用Westernblot方法检测基因缺失及回补效果 | 第48-49页 |
| 3.6 讨论与分析 | 第49-50页 |
| 3.7 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 狐源致病性大肠杆菌htra基因缺失株的生物学特性及毒力研究 | 第51-67页 |
| 4.1 试验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 试验菌株、细胞 | 第51页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 .主要培养基及试剂配制 | 第51-52页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第52页 |
| 4.2 试验方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 htra基因缺失株生长速率的检测 | 第52页 |
| 4.2.2 htra基因缺失株的生化鉴定 | 第52-53页 |
| 4.2.3 htra基因缺失对细菌运动能力的影响 | 第53页 |
| 4.2.4 htra基因缺失对细菌形成生物被膜能力的影响 | 第53页 |
| 4.2.5 缺铁条件下细菌生长能力检测 | 第53-54页 |
| 4.2.6 对环境应激抵抗力的测定 | 第54页 |
| 4.2.7 抗巨噬细胞吞噬能力测定 | 第54-55页 |
| 4.2.8 大肠杆菌htra基因缺失株的毒力检测 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-64页 |
| 4.3.1 htra基因缺失株生长速率的检测 | 第55-56页 |
| 4.3.2 htra基因缺失株生化鉴定结果 | 第56-57页 |
| 4.3.3 细菌运动能力检测结果 | 第57-58页 |
| 4.3.4 细菌形成生物被膜能力的检测 | 第58-59页 |
| 4.3.5 缺铁条件下细菌生长能力检测结果 | 第59页 |
| 4.3.6 细菌抵抗环境应激能力的检测 | 第59-60页 |
| 4.3.7 抗巨噬细胞吞噬的结果 | 第60-61页 |
| 4.3.8 htra基因缺失株毒力的检测结果 | 第61-64页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第64-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
