| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第15-31页 |
| 1.1 链霉菌简介 | 第15-16页 |
| 1.2 链霉菌与抗生素 | 第16-17页 |
| 1.3 链霉菌苯并异色烷醌(benzoisochromanequinones,BIQs)家族抗生素 | 第17-26页 |
| 1.3.1 BIQ家族抗生素的结构及生物学活性的多样性 | 第17-19页 |
| 1.3.2 BIQ抗生素生物合成基因簇的克隆 | 第19-21页 |
| 1.3.3 BIQ家族抗生素生物合成研究进展 | 第21-25页 |
| 1.3.4 BIQ化合物生物合成的调控因子 | 第25-26页 |
| 1.3.5 分泌相关基因 | 第26页 |
| 1.4 链霉菌抗生素调控蛋白家族—SARPs家族(Streptomyces antibiotic regulatoryproteins) | 第26-29页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-44页 |
| 2.1 菌株 | 第31页 |
| 2.2 质粒 | 第31-32页 |
| 2.3 培养基 | 第32-36页 |
| 2.3.1 大肠杆菌培养基 | 第32-33页 |
| 2.3.2 链霉菌培养基 | 第33-36页 |
| 2.4 试剂和溶液 | 第36-39页 |
| 2.4.1 大肠杆菌质粒DNA小量提取试剂 | 第36-37页 |
| 2.4.2 DNA胶回收试剂 | 第37页 |
| 2.4.3 链霉菌原生质体转化试剂 | 第37-38页 |
| 2.4.4 抗生素 | 第38页 |
| 2.4.5 酶和生化试剂 | 第38页 |
| 2.4.6 其他试剂 | 第38-39页 |
| 2.5 实验方法 | 第39-44页 |
| 2.5.1 碱裂解法提取大肠杆菌质粒: | 第39页 |
| 2.5.2 大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl_2法)和转化(热激法): | 第39-40页 |
| 2.5.3 大肠杆菌菌种的保存 | 第40页 |
| 2.5.4 DNA的体外操作 | 第40页 |
| 2.5.5 链霉菌培养和孢子收集 | 第40-41页 |
| 2.5.6 链霉菌的发酵培养和产物粗提取 | 第41页 |
| 2.5.7 链霉菌基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 2.5.8 链霉菌原生质体的制备和转化 | 第41-42页 |
| 2.5.9 链霉菌和大肠杆菌之间的接合转移 | 第42-43页 |
| 2.5.10 Western blot | 第43-44页 |
| 第三章 在链霉菌AM-7161中超量表达med-ORF11 | 第44-50页 |
| 3.1 med-ORF11超量表达质粒的构建 | 第44-47页 |
| 3.1.1 克隆med-ORF11基因 | 第44-46页 |
| 3.1.2 用于接合转移的菌株ET12567(pUZ8002)/ pHSL49的构建 | 第46-47页 |
| 3.2 将pHSL49/ET12567(pUZ8002)转化入链霉菌AM-7161 | 第47-48页 |
| 3.2.1 ET12567(pUZ8002)/pHSL49与链霉菌AM-7161的接合转移 | 第47页 |
| 3.2.2 接合转移转化子的验证 | 第47-48页 |
| 3.3 AM-7161/pHSL49超量表达med-ORF11对美达霉素产量的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 调控基因med-ORF11的功能研究 | 第50-63页 |
| 4.1 基因敲除质粒的构建 | 第50-57页 |
| 4.1.1 med-ORF11 L臂和R臂的克隆 | 第51-55页 |
| 4.1.2 med-ORF11 L臂和R臂的连接 | 第55页 |
| 4.1.3 L臂和R臂连接pYH7 | 第55-56页 |
| 4.1.4 用于接合转移的菌株ET12567(pUZ8002)/pHSL47的构建 | 第56-57页 |
| 4.2 在链霉菌AM-7161中敲除med-ORF11 | 第57-60页 |
| 4.2.1 ET12567(pUZ8002)/ pHSL47与链霉菌AM-7161的接合转移 | 第58页 |
| 4.2.2 基因敲除转化子的筛选及验证 | 第58-60页 |
| 4.3 med-ORF11敲除对于美达霉素产量的影响 | 第60-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 Med-ORF10与med-ORF12启动子区域关系研究 | 第63-72页 |
| 5.1 构建Med-ORF10/med-ORF12启子互作检测系统 | 第63-67页 |
| 5.1.1 异源检测系统构建思路 | 第63-65页 |
| 5.1.2 在BL21(DE3)中检测pHSL33的GFP表达情况 | 第65-67页 |
| 5.2 双质粒系统的构建和功能验证 | 第67-71页 |
| 5.3 讨论 | 第71-72页 |
| 第六章 med-ORF9种间回补初探 | 第72-80页 |
| 6.1 AM-7161中med-ORF9的生物信息学分析 | 第72-74页 |
| 6.2 同源回补质粒的构建 | 第74-76页 |
| 6.2.1 actVI-ORF2的克隆 | 第74-76页 |
| 6.2.2 同源回补质粒pHSL48的构建 | 第76页 |
| 6.3 pHSL48转化链霉菌AM-7161及转化子验证 | 第76-77页 |
| 6.4 不含RBS位点的actVI-ORF2的克隆 | 第77-79页 |
| 6.5 讨论 | 第79-80页 |
| 总结与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 硕士期间发表论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
