| Abstract (In Chinese) | 第4-7页 |
| Abstract (In English) | 第7-8页 |
| Chapter 1 Introduction | 第13-24页 |
| 1.1 The background and significance of the study | 第13-17页 |
| 1.2 Research status at home and abroad | 第17-19页 |
| 1.3 Brief introduction of synthetic biological circuits mentioned in this paper | 第19-20页 |
| 1.4 Main research content and goal | 第20-23页 |
| 1.4.1 CRISPR-d Cas9 based genetic circuits | 第20-21页 |
| 1.4.2 CRISPR-d Cpf1 based genetic circuits | 第21-23页 |
| 1.5 Technology roadmap | 第23-24页 |
| Chapter 2 Experiment materials and methods | 第24-37页 |
| 2.1 Laboratory equipments | 第24页 |
| 2.2 Reagents and materials | 第24-26页 |
| 2.3 Experimental methods | 第26-37页 |
| 2.3.1 Bacterial transformation | 第26页 |
| 2.3.2 Colony picking | 第26-27页 |
| 2.3.3 Mini preparation | 第27-28页 |
| 2.3.4 Restriction digest | 第28页 |
| 2.3.5 Gel electrophoresis | 第28-29页 |
| 2.3.6 DNA elution | 第29-30页 |
| 2.3.7 Gibson Assembly (One-step isothermal DNA assembly) | 第30-31页 |
| 2.3.8 Yeast transformation | 第31-32页 |
| 2.3.9 Yeast cells streaking and culture | 第32页 |
| 2.3.10 Yeast cells induction | 第32-33页 |
| 2.3.11 FACS | 第33-35页 |
| 2.3.12 RNA extraction | 第35-36页 |
| 2.3.13 qRT PCR | 第36-37页 |
| Chapter 3 d Cas9-based genetic circuits | 第37-58页 |
| 3.1 The design for g RNAs | 第37-38页 |
| 3.2 Building d Cas9-based NOT gate | 第38-41页 |
| 3.3 d Cas9-based buffer (YES) gate | 第41-44页 |
| 3.4 Metabolic burden | 第44-50页 |
| 3.5 d Cas9-based beta-estradiol biosensor | 第50-56页 |
| 3.6 Discussion | 第56-57页 |
| 3.7 Brief summary | 第57-58页 |
| Chapter 4 d Cpf1 based genetic circuits | 第58-70页 |
| 4.1 Designing a pre-cr RNA tail for the y EGFP m RNA | 第58-61页 |
| 4.2 d Cpf1 targeting modified m RNA | 第61-65页 |
| 4.3 The construction of d Cpf1 based (galactose) NOT gates | 第65-67页 |
| 4.4 Discussion | 第67-68页 |
| 4.5 Brief summary | 第68-70页 |
| Conclusions | 第70-71页 |
| Outlook | 第71-72页 |
| References | 第72-77页 |
| Papers published in the period of master education | 第77-79页 |
| Acknowledgements | 第79页 |
