| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 克雷伯氏肺炎杆菌简介 | 第11页 |
| 1.2 葡萄糖氧化途径 | 第11-13页 |
| 1.3 葡萄糖氧化途径基因表达规律 | 第13-14页 |
| 1.4 葡萄糖酸的生产 | 第14-15页 |
| 1.5 2-酮基葡萄糖酸的生产 | 第15-17页 |
| 1.6 研究意义 | 第17-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.2 酶和主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第22-24页 |
| 2.1.4 实验用到的溶液和配制方法 | 第24-26页 |
| 2.1.5 发酵培养基配方 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 基因组和质粒的提取 | 第26页 |
| 2.2.2 设计引物和PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.3 TA克隆与连接 | 第27页 |
| 2.2.4 大肠杆菌DH5α化转感受态细胞的制备及化转方法 | 第27-28页 |
| 2.2.5 克雷伯肺炎杆菌电转感受态细胞的制备及电转方法 | 第28-29页 |
| 2.2.6 克雷伯肺炎杆菌基因敲除方法 | 第29-31页 |
| 2.2.7 克雷伯肺炎杆菌及突变菌株在M9 培养基中生长曲线的测定 | 第31页 |
| 2.2.8 克雷伯肺炎杆菌及突变菌株发酵试验 | 第31-32页 |
| 2.2.9 高效液相色谱分析方法 | 第32-36页 |
| 第3章 克雷伯肺炎杆菌突变株的构建 | 第36-41页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 构建基因缺失型克雷伯肺炎杆菌突变菌株 | 第36-40页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第36-37页 |
| 3.2.2 构建敲除用重组质粒T-Δgntk（Stre) | 第37-38页 |
| 3.2.3 在克雷伯肺炎杆菌上进行gntk基因的敲除 | 第38-40页 |
| 3.2.4 重组菌株上抗性基因的消除 | 第40页 |
| 3.3 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 克雷伯肺炎杆菌葡萄糖氧化途径的研究 | 第41-49页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 有氧条件下克雷伯肺炎杆菌及突变菌株生长曲线的测定 | 第41-45页 |
| 4.3 无氧条件下克雷伯肺炎杆菌及突变菌株生长曲线的测定 | 第45-48页 |
| 4.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第5章 克雷伯肺炎杆菌代谢产物-葡萄糖酸的发现与鉴定 | 第49-56页 |
| 5.1 引言 | 第49页 |
| 5.2 克雷伯肺炎杆菌及突变菌株在中性条件下发酵生产 2KGA | 第49页 |
| 5.3 克雷伯肺炎杆菌及突变菌株采用两段发酵法生产 2KGA | 第49-52页 |
| 5.4 葡萄糖酸结构鉴定 | 第52-55页 |
| 5.4.1 初步鉴定 | 第52页 |
| 5.4.2 从发酵液中提纯葡萄糖酸 | 第52页 |
| 5.4.3 质谱分析 | 第52-53页 |
| 5.4.4 核磁分析 | 第53-55页 |
| 5.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第6章 克雷伯肺炎杆菌突变株发酵生产葡萄糖酸工艺优化 | 第56-65页 |
| 6.1 引言 | 第56页 |
| 6.2 克雷伯肺炎杆菌突变株kpΔgad发酵生产葡萄糖酸 | 第56-61页 |
| 6.2.1 p H对突变株kpΔgad发酵生产葡萄糖酸的影响 | 第56-57页 |
| 6.2.2 菌体浓度对突变株kpΔgad发酵生产葡萄糖酸的影响 | 第57-58页 |
| 6.2.3 溶氧对克雷伯肺炎杆菌突变株kpΔgad发酵生产葡萄糖酸的影响 | 第58-59页 |
| 6.2.4 最高溶氧条件下探究菌体浓度对克雷伯肺炎杆菌突变株kpΔgad发酵生产葡萄糖酸的影响 | 第59-60页 |
| 6.2.5 克雷伯肺炎杆菌突变株kpΔgad发酵生产葡萄糖酸 | 第60-61页 |
| 6.3 克雷伯肺炎杆菌突变株kpΔgadΔgnt T在不同p H下发酵生产葡萄糖酸 | 第61-63页 |
| 6.4 本章小结 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75-76页 |
| 附表 1 | 第76-79页 |
| 附表 2 | 第79-91页 |
