| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第16-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-29页 |
| 1.1 喹烯酮 | 第19-22页 |
| 1.1.1 基本情况 | 第19页 |
| 1.1.2 QCT的毒性作用 | 第19-21页 |
| 1.1.3 QCT与ROS | 第21页 |
| 1.1.4 QCT与细胞线粒体损伤 | 第21-22页 |
| 1.2 VDAC | 第22-24页 |
| 1.2.1 VDAC的分类与基本结构 | 第22-23页 |
| 1.2.2 VDAC与细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 1.3 Bakl | 第24-26页 |
| 1.3.1 Bakl的基本结构 | 第24-25页 |
| 1.3.2 Bakl与细胞线粒体凋亡 | 第25-26页 |
| 1.4 Wnt/β-catenin信号通路 | 第26-28页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 VDAC在QCT诱导HepG2细胞线粒体凋亡中作用的研究 | 第29-68页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 药物 | 第29页 |
| 2.2.2 细胞株 | 第29页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.4 试剂盒 | 第30页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 方法 | 第31-44页 |
| 2.3.1 溶液配制 | 第31-33页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.3.3 细胞增殖率测定(MTT法) | 第34页 |
| 2.3.4 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 2.3.5 线粒体膜电位的检测 | 第35页 |
| 2.3.6 线粒体胞浆蛋白的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.7 EGS检测蛋白交联 | 第36页 |
| 2.3.8 VDAC1/VDAC2/VDAC2-△32表达质粒的构建 | 第36-39页 |
| 2.3.9 质粒提取 | 第39-40页 |
| 2.3.10 细胞转染 | 第40-41页 |
| 2.3.11 Calcein-AM/PI法检测活/死细胞 | 第41页 |
| 2.3.12 免疫荧光检测VDAC2在细胞中的定位及分布 | 第41-42页 |
| 2.3.13 细胞总蛋白的提取 | 第42页 |
| 2.3.14 Western blot法检测相关蛋白的表达水平 | 第42-44页 |
| 2.3.15 数据分析 | 第44页 |
| 2.4 结果与分析 | 第44-66页 |
| 2.4.1 VDAC抑制剂DIDS对QCT所致HepG2细胞形态和增殖率的影响 | 第44-45页 |
| 2.4.2 DIDS对QCT诱导的HepG2细胞凋亡率的影响 | 第45-46页 |
| 2.4.3 DIDS对QCT诱导HepG2细胞线粒体凋亡相关蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 2.4.4 DIDS对QCT所致HepG2细胞线粒体膜电位的影响 | 第47-48页 |
| 2.4.5 DIDS对QCT所致的胞浆CytC表达情况的影响 | 第48-49页 |
| 2.4.6 QCT对HepG2细胞VDAC1/2多聚体形成的影响 | 第49-53页 |
| 2.4.7 DIDS对QCT诱导的VDAC1/2多聚体形成的影响 | 第53-54页 |
| 2.4.8 QCT诱导的HepG2细胞凋亡与VDAC2多聚体形成的关系 | 第54-56页 |
| 2.4.9 过表达VDAC1对QCT诱导的VDAC1多聚体形成和CytC释放的影响 | 第56-59页 |
| 2.4.10 过表达VDAC2对QCT诱导的VDAC2多聚体形成和CytC释放的影响 | 第59-64页 |
| 2.4.11 VDAC2 N端对VDAC2细胞定位和二聚体形成的影响 | 第64-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66-67页 |
| 2.5.1 VDAC1在QCT诱导细胞线粒体凋亡中的作用 | 第66页 |
| 2.5.2 VDAC2在QCT诱导细胞线粒体凋亡中的作用 | 第66-67页 |
| 2.5.3 VDAC2 N端对VDAC2线粒体定位和二聚体形成的作用 | 第67页 |
| 2.6 小结 | 第67-68页 |
| 第三章 Bak1在QCT诱导HepG2细胞线粒体凋亡中作用的研究 | 第68-82页 |
| 3.1 引言 | 第68页 |
| 3.2 材料 | 第68-69页 |
| 3.2.1 药物 | 第68页 |
| 3.2.2 细胞株 | 第68页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.4 试剂盒 | 第69页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第69页 |
| 3.3 方法 | 第69-72页 |
| 3.3.1 溶液配制 | 第69页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第69页 |
| 3.3.3 AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 3.3.4 EGS检测蛋白交联 | 第70页 |
| 3.3.5 Bak1表达质粒的构建 | 第70-71页 |
| 3.3.6 质粒提取 | 第71页 |
| 3.3.7 细胞转染 | 第71-72页 |
| 3.3.8 Western blot法检测相关蛋白的表达水平 | 第72页 |
| 3.3.9 数据分析 | 第72页 |
| 3.4 结果与分析 | 第72-80页 |
| 3.4.1 QCT对Bak1蛋白表达的影响 | 第72-73页 |
| 3.4.2 pCMV-N-Flag-Bak1质粒的鉴定结果 | 第73-74页 |
| 3.4.3 过表达Bak1对QCT诱导的HepG2细胞凋亡率的影响 | 第74-76页 |
| 3.4.4 过表达Bak1对QCT诱导的细胞线粒体凋亡相关蛋白表达的影响 | 第76页 |
| 3.4.5 Bak1 siRNA干扰效率检测 | 第76-77页 |
| 3.4.6 干扰Bak1对QCT诱导的HepG2细胞凋亡率的影响 | 第77-78页 |
| 3.4.7 干扰Bak1对QCT诱导的HepG2细胞线粒体凋亡相关蛋白表达的影响 | 第78-79页 |
| 3.4.8 QCT对HepG2细胞Bak1多聚体形成的影响 | 第79-80页 |
| 3.5 讨论 | 第80-81页 |
| 3.5.1 Bak1在QCT诱导的细胞线粒体凋亡中的作用 | 第80-81页 |
| 3.5.2 Bak1多聚体在QCT诱导的细胞线粒体凋亡中的作用 | 第81页 |
| 3.6 小结 | 第81-82页 |
| 第四章 Wnt/β-catenin信号通路在QCT诱导HepG2细胞线粒体凋亡中作用的研究 | 第82-93页 |
| 4.1 引言 | 第82页 |
| 4.2 材料 | 第82-83页 |
| 4.2.1 药物 | 第82页 |
| 4.2.2 细胞株 | 第82页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第82页 |
| 4.2.4 试剂盒 | 第82页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第82-83页 |
| 4.3 方法 | 第83-86页 |
| 4.3.1 溶液配制 | 第83页 |
| 4.3.2 细胞培养 | 第83页 |
| 4.3.3 细胞增殖率测定(MTT法) | 第83页 |
| 4.3.4 细胞凋亡检测 | 第83页 |
| 4.3.5 线粒体膜电位的测定 | 第83页 |
| 4.3.6 Real-time qPCR检测β-catenin基因mRNA的表达 | 第83-85页 |
| 4.3.7 胞质胞核蛋白的提取 | 第85-86页 |
| 4.3.8 数据分析 | 第86页 |
| 4.4 结果与分析 | 第86-91页 |
| 4.4.1 QCT对Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第86-87页 |
| 4.4.2 Wnt/β-catenin信号通路激动剂LiCl对QCT所致的Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第87页 |
| 4.4.3 LiCl对QCT诱导的HepG2细胞增殖和凋亡率的影响 | 第87-89页 |
| 4.4.4 LiC1对QCT诱导的HepG2细胞线粒体凋亡相关蛋白表达的影响 | 第89页 |
| 4.4.5 LiCl对QCT所致HepG2细胞线粒体膜电位的影响 | 第89-90页 |
| 4.4.6 QCT对β-catenin mRNA表达水平的影响 | 第90-91页 |
| 4.4.7 MG132对QCT所致的β-catenin蛋白表达水平的影响 | 第91页 |
| 4.5 讨论 | 第91-92页 |
| 4.5.1 QCT对Wnt/β-catenin信号通路的作用 | 第91-92页 |
| 4.5.2 Wnt/β-catenin信号通路对QCT诱导的细胞增殖和凋亡的影响 | 第92页 |
| 4.5.3 QCT对β-catenin mRNA和蛋白表达水平的影响 | 第92页 |
| 4.6 小结 | 第92-93页 |
| 第五章 QCT诱导产生的ROS对VDAC/Bak1/β-catenin信号通路作用的研究 | 第93-99页 |
| 5.1 引言 | 第93页 |
| 5.2 材料 | 第93-94页 |
| 5.2.1 药物 | 第93页 |
| 5.2.2 细胞株 | 第93页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第93页 |
| 5.2.4 主要试剂盒 | 第93页 |
| 5.2.5 主要仪器 | 第93-94页 |
| 5.3 方法 | 第94-95页 |
| 5.3.1 溶液配制 | 第94页 |
| 5.3.2 细胞培养 | 第94页 |
| 5.3.3 细胞内ROS水平检测 | 第94页 |
| 5.3.4 EGS检测蛋白交联 | 第94页 |
| 5.3.5 线粒体胞浆蛋白的提取 | 第94页 |
| 5.3.6 细胞浆和细胞核蛋白的提取 | 第94-95页 |
| 5.3.7 Western blot法检测相关蛋白的表达水平 | 第95页 |
| 5.3.8 数据分析 | 第95页 |
| 5.4 结果与分析 | 第95-98页 |
| 5.4.1 NAC对QCT诱导产生的ROS的影响 | 第95-96页 |
| 5.4.2 NAC对QCT诱导的VDAC1/2多聚体形成的影响 | 第96页 |
| 5.4.3 NAC对QCT诱导的Bak1多聚体形成的影响 | 第96-97页 |
| 5.4.4 NAC对QCT诱导的Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第97-98页 |
| 5.5 讨论 | 第98页 |
| 5.6 小结 | 第98-99页 |
| 第六章 VDAC1、Bak1与β-catenin在QCT诱导细胞线粒体凋亡中相互关系的研究 | 第99-121页 |
| 6.1 引言 | 第99页 |
| 6.2 材料 | 第99页 |
| 6.2.1 药物 | 第99页 |
| 6.2.2 细胞株 | 第99页 |
| 6.2.3 主要试剂 | 第99页 |
| 6.2.4 试剂盒 | 第99页 |
| 6.2.5 主要仪器 | 第99页 |
| 6.3 方法 | 第99-102页 |
| 6.3.1 溶液配制 | 第99-100页 |
| 6.3.2 细胞培养 | 第100页 |
| 6.3.3 表达质粒的构建 | 第100-101页 |
| 6.3.4 质粒提取 | 第101页 |
| 6.3.5 细胞转染 | 第101页 |
| 6.3.6 细胞凋亡检测 | 第101页 |
| 6.3.7 线粒体膜电位的测定 | 第101-102页 |
| 6.3.8 Western blot法检测相关蛋白的表达水平 | 第102页 |
| 6.3.9 数据分析 | 第102页 |
| 6.4 结果与分析 | 第102-119页 |
| 6.4.1 过表达Bak1对293T细胞凋亡率的影响 | 第102-103页 |
| 6.4.2 过表达Bak1对293T细胞线粒体凋亡相关蛋白表达的影响 | 第103-104页 |
| 6.4.3 过表达Bak1对293T细胞MMP的影响 | 第104-105页 |
| 6.4.4 过表达Bak1对Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第105-106页 |
| 6.4.5 LiCl对过表达Bak1诱导的293T细胞凋亡率的影响 | 第106-107页 |
| 6.4.6 LiCl对过表达Bak1诱导的293T细胞线粒体凋亡相关蛋白表达的影响 | 第107页 |
| 6.4.7 DIDS对Bak1蛋白表达的影响 | 第107-108页 |
| 6.4.8 DIDS对过表达Bak1引起的293T细胞凋亡率的影响 | 第108-109页 |
| 6.4.9 DIDS对过表达Bak1引起的293T细胞线粒体凋亡相关蛋白表达和MMP的影响 | 第109-111页 |
| 6.4.10 DIDS对过表达Bak1所致的Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第111页 |
| 6.4.11 Bak1对QCT诱导的HepG2细胞中β-catenin蛋白表达水平的影响 | 第111-112页 |
| 6.4.12 VDAC1对QCT诱导的HepG2细胞中β-catenin蛋白表达水平的影响 | 第112-114页 |
| 6.4.13 β-catenin对QCT诱导的HepG2细胞中VDAC1和Bak1多聚体形成的影响 | 第114-119页 |
| 6.5 讨论 | 第119-120页 |
| 6.5.1 关于VDAC、Bak1和β-catenin通路在细胞线粒体凋亡中的相互关系 | 第119-120页 |
| 6.5.2 VDAC1、Bak1多聚体和β-catenin在QCT所致的HepG2细胞凋亡中的关系 | 第120页 |
| 6.6 小结 | 第120-121页 |
| 第七章 结论及研究展望 | 第121-123页 |
| 7.1 结论 | 第121-122页 |
| 7.2 研究展望 | 第122-123页 |
| 第八章 创新点 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 个人简介 | 第137页 |
