| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 醛酮还原酶 | 第14-16页 |
| 1.1.1 醛酮还原酶的简介 | 第14页 |
| 1.1.2 醛酮还原酶的催化机制 | 第14-15页 |
| 1.1.3 醛酮还原酶催化反应类型 | 第15页 |
| 1.1.4 醛酮还原酶不对称催化反应的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 辅因子再生 | 第16-19页 |
| 1.2.1 化学法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 电化学法 | 第18页 |
| 1.2.3 光化法 | 第18页 |
| 1.2.4 酶法 | 第18-19页 |
| 1.3 全细胞催化反应的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 全细胞催化反应的形式 | 第19-20页 |
| 1.3.2 全细胞作为催化剂的优势 | 第20-21页 |
| 1.3.3 全细胞催化反应的劣势 | 第21页 |
| 1.4 改善生物催化反应的策略 | 第21-23页 |
| 1.4.1 蛋白质工程策略 | 第21页 |
| 1.4.2 底物工程策略 | 第21-22页 |
| 1.4.3 介质工程策略 | 第22-23页 |
| 1.5 本论文的研究思想 | 第23-25页 |
| 第二章 AKRs和GDH的表达及酶学性质研究 | 第25-42页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第25-27页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 引物设计及酶切位点 | 第26页 |
| 2.2.4 主要溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 AKRs基因的获取及克隆 | 第27-29页 |
| 2.3.2 AKRs的表达 | 第29页 |
| 2.3.3 AKRs的纯化 | 第29页 |
| 2.3.4 AKRs的活力测定 | 第29-30页 |
| 2.4 AKRs的酶学性质研究 | 第30页 |
| 2.4.1 AKRs的最适温度及热稳定性 | 第30页 |
| 2.4.2 AKRs的最适pH及pH稳定性 | 第30页 |
| 2.4.3 不同金属离子对AKRs活性的影响 | 第30页 |
| 2.5 GDH的表达及活力测定 | 第30-31页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第31-40页 |
| 2.6.1 AKRs的克隆 | 第31-33页 |
| 2.6.2 AKRs诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.6.3 AKRs的纯化 | 第34-35页 |
| 2.6.4 AKRs的酶学性质研究 | 第35-39页 |
| 2.6.5 GDH的表达及活力测定 | 第39-40页 |
| 2.7 小结 | 第40-42页 |
| 第三章 AKRs酶催化制备(S)-NEMCA-HEPE | 第42-50页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.3.1 NEMCA的合成 | 第43页 |
| 3.3.2 合成(R,S)-NEMCA-HEPE标准品 | 第43-44页 |
| 3.3.3 AKRs酶催化制备(S)-NEMCA-HEPE | 第44页 |
| 3.3.4 反应转化率及立体选择性的检测方法 | 第44页 |
| 3.3.5 分子模拟 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-48页 |
| 3.4.1 NEMCA的合成 | 第45页 |
| 3.4.2 (R,S)-NEMCA-HEPE标准品的合成 | 第45页 |
| 3.4.3 AKRs酶催化制备(S)-NEMCA-HEPE | 第45-46页 |
| 3.4.4 AKRs的氨基酸序列比对 | 第46-47页 |
| 3.4.5 分子模拟 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-50页 |
| 第四章 AKR-GDH全细胞催化制备(S)-NEMCA-HEPE | 第50-64页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第50-51页 |
| 4.2.1 实验菌种 | 第50页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.3.1 构建AKR-GDH重组全细胞 | 第51页 |
| 4.3.2 DES的制备 | 第51页 |
| 4.3.3 AKR-GDH全细胞催化制备(S)-NEMCA-HEPE | 第51-52页 |
| 4.3.4 紫外光谱检测 | 第52页 |
| 4.3.5 流式细胞仪检测 | 第52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-62页 |
| 4.4.1 AKR和GDH的共表达 | 第52页 |
| 4.4.2 AKR-GDH全细胞催化制备(S)-NEMCA-HEPE | 第52-54页 |
| 4.4.3 iolS-GDH全细胞催化反应的参数优化 | 第54-57页 |
| 4.4.4 不同添加剂对细胞催化反应的影响 | 第57-59页 |
| 4.4.5 紫外光谱检测细胞膜的通透性 | 第59-61页 |
| 4.4.6 流式细胞仪检测细胞膜的通透性 | 第61-62页 |
| 4.5 小结 | 第62-64页 |
| 第五章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 硕士期间的科研成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
