| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 小麦淀粉 | 第11-14页 |
| 1.1.1 小麦的直链淀粉与支链淀粉 | 第11-12页 |
| 1.1.2 淀粉合成的相关酶 | 第12-14页 |
| 1.1.3 逆境对淀粉合成酶活性及淀粉含量的影响 | 第14页 |
| 1.2 启动子的研究现状 | 第14-17页 |
| 1.2.1 启动子的核心结构和功能 | 第15页 |
| 1.2.2 启动子的克隆 | 第15-16页 |
| 1.2.3 启动子分析方法 | 第16页 |
| 1.2.4 与淀粉合成相关酶启动子的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 DNA甲基化研究现状 | 第17-19页 |
| 1.3.1 DNA甲基化与去甲基化 | 第17-18页 |
| 1.3.2 非生物胁迫对植物DNA甲基化的影响 | 第18页 |
| 1.3.3 启动子甲基化对基因表达的影响 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 sssⅡa、sbeⅡb启动子的克隆与瞬时表达 | 第21-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1.1 材料与种植 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 小麦总DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 查找sssⅡa、sbeⅡb启动子序列 | 第22页 |
| 2.2.3 sssⅡa、sbeⅡb启动子序列功能元件预测 | 第22页 |
| 2.2.4 设计引物克隆目的片段 | 第22页 |
| 2.2.5 sssⅡa、sbeⅡb启动子PCR产物与克隆载体连接 | 第22-24页 |
| 2.2.5.1 sssⅡa、sbeⅡb启动子PCR扩增目的基因 | 第22-23页 |
| 2.2.5.2 sssⅡa、sbeⅡb启动子PCR产物的回收纯化与连接转化 | 第23页 |
| 2.2.5.3 热激法转化连接产物至Trans-T1细胞 | 第23页 |
| 2.2.5.4 质粒提取及双酶切验证 | 第23-24页 |
| 2.2.5.5 测序 | 第24页 |
| 2.2.5.6 序列比对 | 第24页 |
| 2.2.6 sssⅡa、sbeⅡb启动子与表达载体连接 | 第24-25页 |
| 2.2.6.1 sssⅡa-TransT1、sbeⅡb-TransT1重组质粒菌液活化与表达载体转化 | 第24页 |
| 2.2.6.2 质粒的提取及双酶切 | 第24页 |
| 2.2.6.3 回收纯化与连接转化 | 第24-25页 |
| 2.2.6.4 热激法转化sssⅡa-GFP、sbeⅡb-GFP质粒至Trans-T1细胞 | 第25页 |
| 2.2.6.5 质粒的提取及双酶切验证 | 第25页 |
| 2.2.7 sssⅡa-GFP、sbeⅡb-GFP在原生质体中瞬时表达 | 第25-26页 |
| 2.2.7.1 试剂与仪器 | 第25页 |
| 2.2.7.2 材料与方法 | 第25页 |
| 2.2.7.3 PEG介导玉米原生质体转化 | 第25-26页 |
| 2.3 结果分析 | 第26-33页 |
| 2.3.1 sssⅡa、sbeⅡb启动子序列功能元件预测 | 第26-27页 |
| 2.3.2 sssⅡa和sbeⅡb启动子的克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.3 sssⅡa、sbeⅡb启动子与克隆载体连接及测序结果 | 第28-31页 |
| 2.3.4 sssⅡa、sbeⅡb启动子与表达载体连接 | 第31-32页 |
| 2.3.5 sssⅡa-GFP重组质粒在原生质体中瞬时表达 | 第32-33页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 sssⅡa、sbeⅡa启动子甲基化分析 | 第35-47页 |
| 3.1 材料及实验仪器 | 第35页 |
| 3.1.1 材料与种植 | 第35页 |
| 3.1.2 处理与取样 | 第35页 |
| 3.1.3 实验仪器和试剂 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 DNA提取方法及样品质量控制 | 第35-36页 |
| 3.2.2 DNA重亚硫酸盐处理 | 第36页 |
| 3.2.3 sssⅡa、sbeⅡa启动子的序列甲基化位点预测与引物设计 | 第36页 |
| 3.2.4 样本目标片段多重PCR反应 | 第36页 |
| 3.2.5 样本添加特异性标签序列 | 第36页 |
| 3.2.6 定量后上机测序 | 第36页 |
| 3.2.7 数据统计及分析 | 第36页 |
| 3.3 结果分析 | 第36-45页 |
| 3.3.1 DNA质量检测 | 第36-37页 |
| 3.3.2 引物设计 | 第37页 |
| 3.3.3 胞嘧啶转化率 | 第37-39页 |
| 3.3.4 原始数据质量评估 | 第39-42页 |
| 3.3.4.1 原始测序数据统计 | 第39-40页 |
| 3.3.4.2 有效reads筛选统计 | 第40页 |
| 3.3.4.3 各样本目标区域测序深度统计 | 第40-42页 |
| 3.3.5 甲基化水平分析 | 第42-43页 |
| 3.3.6 甲基化水平相似性分析 | 第43-45页 |
| 3.3.7 甲基化水平差异位点分析 | 第45页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 sssⅡa和sbeⅡa相对表达量与淀粉含量的相关分析 | 第47-53页 |
| 4.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第47页 |
| 4.2.2 RNA的提取和cDNA的合成 | 第47-48页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR | 第48页 |
| 4.2.4 淀粉含量的测定方法 | 第48页 |
| 4.3 结果分析 | 第48-50页 |
| 4.3.1 不同处理各时期的sssIIa相对表达量 | 第48-49页 |
| 4.3.2 不同处理各时期的sbeIIa相对表达量 | 第49页 |
| 4.3.3 总淀粉含量与基因相对表达量 | 第49-50页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第50-53页 |
| 创新与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 附件 | 第64页 |
