| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-8页 |
| 第一章 材料与仪器 | 第8-13页 |
| 1.1 细胞培养及细胞培养 | 第8页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第8页 |
| 1.3 主要实验试剂及配制方法 | 第8-11页 |
| 1.3.1 主要实验试剂 | 第8-9页 |
| 1.3.2 主要试剂配制方法 | 第9-11页 |
| 1.4 实验仪器和设备 | 第11-13页 |
| 第二章 实验方法 | 第13-29页 |
| 2.1 重组质粒的构建 | 第13-17页 |
| 2.1.1 引物设计与合成 | 第14-16页 |
| 2.1.2 目的基因扩增及载体构建 | 第16-17页 |
| 2.2 重组质粒扩增 | 第17-18页 |
| 2.2.1 重组质粒转化大肠杆菌DH5α | 第17-18页 |
| 2.2.2 菌株的保存 | 第18页 |
| 2.3 细胞培养 | 第18-20页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第18-19页 |
| 2.3.2 细胞传代 | 第19页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第19-20页 |
| 2.4 肿瘤细胞转染及转化效率优化 | 第20-21页 |
| 2.4.1 肿瘤细胞转染 | 第20-21页 |
| 2.4.2 转化效率优化 | 第21页 |
| 2.5 检测融合基因M-IL-2(88Arg, 125Ala)在mRNA水平的表达 | 第21-24页 |
| 2.5.1 细胞总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.5.2 RT-PCR检测外源基因M-IL-2(88Arg, 125Ala)在mRNA水平的表达 | 第22-24页 |
| 2.6 细胞总蛋白的提取、检测 | 第24-27页 |
| 2.6.1 细胞总蛋白的提取 | 第24页 |
| 2.6.2 Western-blot检测目的蛋白 | 第24-27页 |
| 2.7 融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)的表达对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响 | 第27-28页 |
| 2.7.1 CKK-8 检测融合蛋白表达对肿瘤细胞Hela、U87增殖的影响 | 第27-28页 |
| 2.7.2 TUNEL法检测融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala) 表达对肿瘤细胞Hela凋亡的影响 | 第28页 |
| 2.8 统计学分析 | 第28-29页 |
| 第三章 结果 | 第29-42页 |
| 3.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第29-32页 |
| 3.1.1 提取重组质粒pPICZαA/M-IL-2(88Arg, 125Ala)并鉴定 | 第29-31页 |
| 3.1.2 重组质粒构建及鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 细胞培养 | 第32-34页 |
| 3.3. 融合蛋白M-IL-2(88Arg, 125Ala)在肿瘤细胞中的表达 | 第34-38页 |
| 3.3.1 细胞转染 | 第34-36页 |
| 3.3.2 RT-PCR检测M-IL-2(88Arg,125Ala)在Hela及U87细胞中m RNA的转录 | 第36-37页 |
| 3.3.3 Western blot检测M-IL-2(88Arg, 125Ala)在Hela及U87细胞中的表达 | 第37-38页 |
| 3.4 CKK-8、TUNEL法检测融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响 | 第38-42页 |
| 3.4.1 CKK-8 检测融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)对肿瘤细胞增殖的影响 | 第38-40页 |
| 3.4.2 TUNEL检测融合蛋白表达对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第40-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 文献综述 | 第47-55页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
