摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4页 |
中英文缩略词表 | 第8-9页 |
第1章 引言 | 第9-12页 |
1.1 概述 | 第9-12页 |
1.1.1 年龄相关性黄斑变性(AMD) | 第9页 |
1.1.2 乙酰胆碱酯酶诱导细胞凋亡 | 第9-10页 |
1.1.3 氧化应激(Oxidative Stress)造成细胞凋亡 | 第10-11页 |
1.1.4 乙酰胆碱酯酶(ACh E)与氧化应激(Oxidative Stress) | 第11-12页 |
第2章 材料与方法 | 第12-23页 |
2.1 材料 | 第12-16页 |
2.1.1 细胞及动物分组 | 第12页 |
2.1.2 PCR所需 | 第12页 |
2.1.3 试剂 | 第12-13页 |
2.1.4 免疫荧光染色所需 | 第13页 |
2.1.5 溶液配制 | 第13-15页 |
2.1.6 实验仪器 | 第15-16页 |
2.2 实验方法 | 第16-22页 |
2.2.1 细胞培养 | 第16-17页 |
2.2.2 细胞爬片制作 | 第17页 |
2.2.3 MTT测定法 | 第17页 |
2.2.4 细胞沉默ACh E基因(细胞转染) | 第17-18页 |
2.2.5 细胞ROS测定 | 第18页 |
2.2.6 PCR法 | 第18-19页 |
2.2.7 冰冻切片 | 第19页 |
2.2.8 免疫荧光染色 | 第19-20页 |
2.2.9 TUNEL标记 | 第20-21页 |
2.2.10蛋白印迹 | 第21-22页 |
2.3 统计学分析 | 第22-23页 |
第3章 结果 | 第23-33页 |
3.1 碘酸钠(Na IO3)诱导ARPE19细胞凋亡 | 第23页 |
3.1.1 MTT法显示碘酸钠能诱导ARPE19细胞凋亡 | 第23页 |
3.2 碘酸钠诱导的ARPE19细胞凋亡模型中,ACh E过表达 | 第23-25页 |
3.2.1 细胞免疫荧光法检测ACh E显示细胞凋亡中,ACh E表达增高 | 第23-24页 |
3.2.2 蛋白印迹法检测细胞凋亡中ACh E表达量也增高。 | 第24-25页 |
3.3 加入ACh E抑制剂(多奈哌齐)后,通过抑制氧化应激通路来减少碘酸钠诱导的ARPE19细胞凋亡 | 第25-27页 |
3.3.1 细胞TUNEL法显示,加入多奈哌齐后,细胞凋亡数量低于未加抑制剂组 | 第25页 |
3.3.2 加入多奈哌齐后,氧化指标低于未加抑制剂组 | 第25-27页 |
3.4 细胞沉默ACh E基因后,通过抑制氧化应激通路来减少碘酸钠诱导的ARPE19细胞凋亡 | 第27-29页 |
3.4.1 免疫荧光检测,沉默ACh E基因后,ACh E表达减少 | 第27页 |
3.4.2 TUNEL法检测,细胞沉默ACh E基因后,细胞凋亡数量低于正常细胞组 | 第27-28页 |
3.4.3 蛋白印迹法检测,细胞沉默ACh E基因后,氧化指标NOX2表达量低于正常细胞组 | 第28-29页 |
3.5 ACh E-/+老鼠能减少碘酸钠诱导的视网膜色素上皮细胞及光感受器细胞的凋亡 | 第29-33页 |
3.5.1 PCR法鉴定老鼠基因型及免疫荧光检测ACh E表达 | 第29-30页 |
3.5.2 冰冻切片TUNEL法计算,ACh E基因敲除小鼠细胞凋亡数量低于正常小鼠组 | 第30-31页 |
3.5.3 冰冻切片免疫荧光法检测,ACh E基因敲除小鼠的NOX2含量低于正常小鼠组 | 第31-33页 |
第4章 讨论 | 第33-37页 |
第5章 结论 | 第37-38页 |
致谢 | 第38-39页 |
参考文献 | 第39-43页 |
综述 | 第43-50页 |
参考文献 | 第47-50页 |