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产烷烃基因工程菌的构建

摘要第4-7页
ABSTRACT第7-9页
第一章 文献综述第18-28页
    1.1 航空燃油总述及其可再生替代物的研究第18-19页
        1.1.1 航空燃油简介第18页
        1.1.2 可再生航空燃油生产的现行技术第18-19页
    1.2 生物燃料简介第19-21页
        1.2.1 燃料乙醇第19-20页
        1.2.2 燃料丁醇第20-21页
        1.2.3 生物柴油第21页
    1.3 烷烃生物合成途径的研究第21-25页
    1.4 本课题的研究目的及思路第25-28页
        1.4.1 研究目的第25页
        1.4.2 研究思路第25-28页
第二章 烷烃生物合成途径的构建第28-42页
    2.1 引言第28页
    2.2 实验材料与仪器第28-29页
        2.2.1 菌株,质粒和引物第28-29页
        2.2.2 培养基第29页
        2.2.3 试剂和仪器第29页
    2.3 实验方法第29-34页
        2.3.1 不动杆菌中酰基辅酶A还原酶基因acr1的克隆及重组载体的构建第29-31页
        2.3.2 不动杆菌中酰基辅酶A还原酶基因acrM的克隆及重组载体的构建第31-32页
        2.3.3 念珠藻中醛脱羰基酶基因出的克隆及重组载体的构建第32-33页
        2.3.4 含有acr1/dc以及acrM/dc基因工程大肠杆菌的构建第33页
        2.3.5 工程菌的诱导表达及烷烃的生产和萃取第33页
        2.3.6 产物的GC-MS检测及所用方法第33-34页
    2.4 实验结果与讨论第34-41页
        2.4.1 acr1基因的扩增与测序和表达载体pETDuet-acr1的构建第34-36页
        2.4.2 acrM基因的扩增与测序和表达载体pETDuet-acrM的构建第36-37页
        2.4.3 dc基因的扩增与测序和表达载体pETDuet-acr-dc的构建第37-39页
        2.4.4 工程大肠杆菌的摇瓶发酵与产物检测即代谢途径的可行性验证第39-41页
    2.5 小结第41-42页
第三章 通过基因工程手段调控烷烃链长第42-58页
    3.1 引言第42页
    3.2 实验材料与仪器第42-43页
        3.2.1 菌株,质粒和引物第42页
        3.2.2 培养基第42-43页
        3.2.3 试剂和仪器第43页
    3.3 实验方法第43-45页
        3.3.1 重组载体pETDuet-uc-acrM的构建第43页
        3.3.2 重组载体pETDuet-uc-acrM-dc的构建第43-44页
        3.3.3 含有uc/acrM/dc基因工程大肠杆菌的构建第44页
        3.3.4 工程菌的诱导表达及产物的生产和萃取第44页
        3.3.5 产物的GC-MS检测及定量第44-45页
    3.4 实验结果与讨论第45-56页
        3.4.1 pETDuet-uc-acrM表达载体的构建及鉴定第45-46页
        3.4.2 pETDuet-uc-acrM-dc表达载体的构建及鉴定第46-47页
        3.4.3 几种代谢物标准曲线的制作第47-52页
        3.4.4 工程大肠杆菌的摇瓶发酵及中间产物、终产物定量检测第52-56页
    3.5 小结第56-58页
第四章 中链烷烃的产量优化第58-70页
    4.1 引言第58页
    4.2 实验材料与仪器第58-59页
        4.2.1 菌株,质粒和引物第58-59页
        4.2.2 培养基第59页
        4.2.3 试剂和仪器第59页
    4.3 实验方法第59-61页
        4.3.1 大肠杆菌基因组的提取第59页
        4.3.2 大肠杆菌中酰基辅酶A合成酶基因fadD的克隆及重组载体的构建第59-60页
        4.3.3 含有uc/acrM/dc/fadD的基因工程大肠杆菌的构建第60-61页
        4.3.4 工程菌的诱导表达及产物的生产和萃取第61页
        4.3.5 产物的GC-MS检测及定量第61页
    4.4 实验结果与讨论第61-68页
        4.4.1 细菌基因组提取实验第61-62页
        4.4.2 fadD基因的扩增与测序和表达载体的构建第62-64页
        4.4.3 双重抗性载体的共表达第64-65页
        4.4.4 工程大肠杆菌的摇瓶发酵及中间产物、终产物定量检测第65-68页
    4.5 小结第68-70页
第五章 引入植物ACP及FAS以提高烷烃产量的尝试第70-92页
    5.1 引言第70页
    5.2 实验材料与仪器第70-71页
        5.2.1 菌株,质粒和引物第70-71页
        5.2.2 培养基第71页
        5.2.3 试剂和仪器第71页
    5.3 实验方法第71-75页
        5.3.1 重组载体pET28a-JC的构建第71-75页
        5.3.2 lac启动子的克隆与重组载体pET28a-lac的构建第75页
    5.4 实验结果与讨论第75-91页
        5.4.1 pET28a-JC重组载体的构建及鉴定第75-89页
        5.4.2 lac启动子的扩增与测序及表达载体的构建第89-91页
    5.5 小结第91-92页
第六章 结论与展望第92-96页
参考文献第96-100页
附录一 本实验所用化学试剂第100-102页
附录二 本实验所用设备仪器第102-104页
致谢第104-106页
研究成果及发表的学术论文第106-108页
作者及导师简介第108-109页
附件第109-110页

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