| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 0 前言 | 第17-56页 |
| 1. 脂肪组织概述 | 第17-20页 |
| 1.1 脂肪动员 | 第17-18页 |
| 1.2 脂肪的内分泌功能 | 第18-20页 |
| 1.3 肥胖和炎症 | 第20页 |
| 2. 代谢与免疫 | 第20-26页 |
| 2.1 免疫与代谢的进化联系 | 第21-22页 |
| 2.2 脂肪组织中的常驻型免疫细胞(resident immune cell) | 第22-26页 |
| 3. 脂肪分解的调控 | 第26-32页 |
| 3.1 脂肪分解甘油三酯的主要酶和蛋白 | 第26-29页 |
| 3.2 脂肪分解的营养调节 | 第29-32页 |
| 3.3 减重过程中的免疫变化 | 第32页 |
| 4. 介导炎症反应的脂类 | 第32-38页 |
| 4.1 促炎症脂质 | 第32-33页 |
| 4.2 PLA2介绍 | 第33-35页 |
| 4.3 前列腺素类物质 | 第35-38页 |
| 5. 海参皂苷 | 第38-42页 |
| 5.1 海参概况 | 第38-39页 |
| 5.2 海参皂苷 | 第39-40页 |
| 5.3 海参皂苷的生理活性 | 第40-42页 |
| 6. 立题依据和研究思路 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-56页 |
| 第一章 脂解过程中诱导巨噬细胞迁移的作用物质的研究 | 第56-101页 |
| 第一节 PGE2诱导了脂解过程中巨噬细胞募集 | 第57-75页 |
| 1. 材料与试剂 | 第57-59页 |
| 1.1 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.2 主要耗材 | 第58页 |
| 1.3 细胞株 | 第58页 |
| 1.4 实验仪器 | 第58-59页 |
| 2. 实验方法 | 第59-64页 |
| 2.1 3T3L1细胞的分化 | 第59页 |
| 2.2 3T3L1脂肪细胞的刺激 | 第59页 |
| 2.3 制备条件培养基 | 第59-60页 |
| 2.4 细胞蛋白含量测定 | 第60页 |
| 2.5 游离脂肪酸和甘油的测定 | 第60页 |
| 2.6 一氧化氮的测定 | 第60页 |
| 2.7 脂肪酸/BSA复合物的制备 | 第60页 |
| 2.8 RAW 264.7巨噬细胞迁移 | 第60-61页 |
| 2.9 细胞总RNA提取 | 第61-62页 |
| 2.10 Q-PCR检测基因表达量 | 第62-63页 |
| 2.11 脂肪酸组成分析 | 第63页 |
| 2.12 数据分析 | 第63-64页 |
| 3. 实验结果 | 第64-72页 |
| 3.1 毛喉素可刺激脂肪细胞脂解 | 第64页 |
| 3.2 异丙肾上腺素可刺激脂肪细胞脂解 | 第64-65页 |
| 3.3 脂解过程中释放的脂肪酸种类组成 | 第65页 |
| 3.4 脂解可以刺激巨噬细胞迁移 | 第65-66页 |
| 3.5 脂解对脂肪细胞mcp1 mRNA表达量的影响 | 第66-67页 |
| 3.6 脂解对脂肪细胞一氧化氮生成的影响 | 第67-68页 |
| 3.7 脂肪酸对巨噬细胞趋化能力的影响 | 第68-69页 |
| 3.8 脂解促进了花生四烯酸和及类花生酸的生成 | 第69-70页 |
| 3.9 AA和前列腺素对巨噬细胞趋化能力的影响 | 第70-71页 |
| 3.10 COX抑制剂对巨噬细胞趋化能力的影响 | 第71-72页 |
| 4. 讨论 | 第72-75页 |
| 第二节 脂解过程中PGE2生成的调节机制研究 | 第75-93页 |
| 1. 材料与仪器 | 第76-77页 |
| 1.1 主要试剂 | 第76-77页 |
| 1.2 主要耗材 | 第77页 |
| 1.3 实验仪器 | 第77页 |
| 1.4 细胞株 | 第77页 |
| 2. 实验方法 | 第77-81页 |
| 2.1 3T3L1细胞培养与分化 | 第77-78页 |
| 2.2 细胞RNA提取 | 第78页 |
| 2.3 Q-PCR检测基因表达量 | 第78页 |
| 2.4 Western blotting | 第78-79页 |
| 2.5 细胞膜分离 | 第79-80页 |
| 2.6 EGFP-cPLA2质粒转染 | 第80页 |
| 2.7 显微镜观察cPLA2转位 | 第80页 |
| 2.8 数据统计与图表绘制 | 第80-81页 |
| 3. 实验结果 | 第81-90页 |
| 3.1 Fsk处理对脂肪细胞cPLA2 mRNA表达量的影响 | 第81页 |
| 3.2 Fsk促进了脂肪细胞cPLA2a的磷酸化 | 第81-83页 |
| 3.3 Fsk对脂肪细胞cPLA2a转位的影响 | 第83-85页 |
| 3.4 Fsk对脂肪细胞COXs基因表达的影响 | 第85-86页 |
| 3.5 Fsk对脂肪细胞ACSL4和LPCAT基因表达的影响 | 第86-88页 |
| 3.6 脂解培养基对巨噬细胞炎症反应的影响 | 第88-90页 |
| 4. 讨论 | 第90-93页 |
| 本章小结 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 第二章 CD36对脂解诱导的巨噬细胞募集的影响 | 第101-140页 |
| 第一节 CD36调节脂解产生PGE2的作用机制研究 | 第102-116页 |
| 1. 材料与试剂 | 第102-103页 |
| 1.1 主要试剂 | 第102-103页 |
| 1.2 主要耗材 | 第103页 |
| 1.3 实验仪器 | 第103页 |
| 2. 实验方法 | 第103-104页 |
| 2.1 SiRNA敲除CD36 | 第103-104页 |
| 2.2 巨噬细胞迁移实验 | 第104页 |
| 2.3 游离脂肪酸和甘油测定 | 第104页 |
| 2.4 RNA提取和RT-PCR | 第104页 |
| 2.5 western blotting | 第104页 |
| 2.6 数据统计 | 第104页 |
| 3. 实验结果 | 第104-114页 |
| 3.1 SiRNA对脂肪细胞中CD36的敲除作用 | 第104-105页 |
| 3.2 CD36敲除可以减少脂解诱导的巨噬细胞迁移 | 第105-107页 |
| 3.3 CD36对AA浓度的影响 | 第107-108页 |
| 3.4 CD36对PGE2浓度的影响 | 第108-109页 |
| 3.5 CD36对脂肪细胞cPLA2a基因表达量的影响 | 第109-110页 |
| 3.6 CD36对脂肪细胞cPLA2a和ERK1/2磷酸化的影响 | 第110-112页 |
| 3.7 CD36对脂肪细胞中COXs基因表达量的影响 | 第112页 |
| 3.8 CD36对脂肪细胞cPLA2转位的影响 | 第112-114页 |
| 4. 讨论 | 第114-116页 |
| 第二节 CD36缺失小鼠禁食后脂肪组织中巨噬细胞的变化 | 第116-133页 |
| 1. 材料与试剂 | 第117-118页 |
| 1.1 主要试剂 | 第117页 |
| 1.2 耗材 | 第117页 |
| 1.3 实验动物 | 第117页 |
| 1.4 实验仪器 | 第117-118页 |
| 2. 实验方法 | 第118-121页 |
| 2.1 脂肪组织和血浆取材 | 第118页 |
| 2.2 脂肪组织包埋与切片 | 第118页 |
| 2.3 脂肪组织免疫组化染色 | 第118-119页 |
| 2.4 分离脂肪组织基质血管组分 | 第119页 |
| 2.5 流式细胞仪检测 | 第119-120页 |
| 2.6 脂肪组织RNA提取 | 第120-121页 |
| 2.7 RT-PCR检测基因表达 | 第121页 |
| 2.8 数据统计 | 第121页 |
| 3. 实验结果 | 第121-130页 |
| 3.1 CD36对体重、体脂肪的影响 | 第121-122页 |
| 3.2 CD36对禁食前后血清FFA的影响 | 第122页 |
| 3.3 CD36对脂肪组织巨噬细胞特征标记物的影响CD68 | 第122-124页 |
| 3.4 CD36对脂肪组织中巨噬细胞数目的影响 | 第124-125页 |
| 3.5 CD36对脂肪组织中巨噬细胞分型的影响 | 第125-127页 |
| 3.6 CD36对脂肪组织中前列腺素含量的影响 | 第127-128页 |
| 3.7 CD36对脂肪组织中cPLA2a基因表达的影响 | 第128-129页 |
| 3.8 脂肪组织中F4/80与COX1表达的相关性 | 第129-130页 |
| 4. 讨论 | 第130-133页 |
| 4.1 禁食诱导的脂解促进了M2型巨噬细胞募集 | 第130-132页 |
| 4.2 CD36敲除抑制了脂解诱导巨噬细胞募集 | 第132-133页 |
| 本章小结 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-140页 |
| 第三章 海参皂苷对肥胖小鼠的改善作用 | 第140-160页 |
| 1. 材料和试剂 | 第141-142页 |
| 1.1 主要试剂 | 第141页 |
| 1.2 实验仪器 | 第141-142页 |
| 1.3 实验动物 | 第142页 |
| 2. 实验方法 | 第142-145页 |
| 2.1 动物分组 | 第142-143页 |
| 2.2 肝脏脂质抽提及测定 | 第143页 |
| 2.3 肝脏细胞亚组分分离 | 第143-144页 |
| 2.4 FAS活力测定 | 第144页 |
| 2.5 CPT活力测定 | 第144页 |
| 2.6 组织RNA提取 | 第144页 |
| 2.7 RT-PCR检测基因表达量 | 第144-145页 |
| 2.8 肝脏AMPK蛋白水平检测 | 第145页 |
| 2.9 数据统计 | 第145页 |
| 3. 实验结果 | 第145-154页 |
| 3.1 EA对小鼠体重和体脂肪含量的影响 | 第145-146页 |
| 3.2 EA对小鼠肝脏脂质的影响 | 第146-147页 |
| 3.3 EA对小鼠肝脏脂肪合成代谢的影响 | 第147-148页 |
| 3.4 EA对小鼠肝脏脂肪分解代谢的影响 | 第148-150页 |
| 3.5 EA对小鼠脂联素和脂联素受体的影响 | 第150-151页 |
| 3.6 EA对血清TNF-α的影响 | 第151-152页 |
| 3.7 EA对小鼠脂肪巨噬细胞含量的影响 | 第152页 |
| 3.8 EA对小鼠脂肪中PGE2含量的影响 | 第152-153页 |
| 3.9 EA对小鼠脂肪中COX基因表达的影响 | 第153-154页 |
| 4. 讨论 | 第154-157页 |
| 本章小结 | 第157-158页 |
| 参考文献 | 第158-160页 |
| 总结与展望 | 第160-162页 |
| 本论文的特色及创新之处 | 第162-163页 |
| 个人简历 | 第163-164页 |
| 博士期间学术成果 | 第164-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
