| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第10-44页 |
| 1.1 斑马鱼胚胎的早期发育过程 | 第10-17页 |
| 1.1.1 斑马鱼做为模式生物的优势 | 第11页 |
| 1.1.2 以斑马鱼为代表的脊椎动物胚胎发育过程 | 第11-17页 |
| 1.2 胚胎早期发育过程中图式的形成 | 第17-31页 |
| 1.2.1 胚胎早期发育三胚层的发育命运 | 第17-18页 |
| 1.2.2 胚层诱导的信号调控 | 第18-25页 |
| 1.2.3 胚胎背腹轴线的建立 | 第25-29页 |
| 1.2.4 形态素在胚层诱导和背腹分化中的作用 | 第29-31页 |
| 1.3 Bmp 信号通路 | 第31-43页 |
| 1.3.1 Bmp 信号通路简介 | 第31-36页 |
| 1.3.2 Bmp 信号在斑马鱼胚胎早期发育中的作用 | 第36-39页 |
| 1.3.3 Bmp 浓度梯度的分子调控 | 第39-43页 |
| 1.4 本课题的研究目的 | 第43-44页 |
| 第2章 材料和方法 | 第44-67页 |
| 2.1 克隆构建 | 第44-48页 |
| 2.1.1 载体改造策略 | 第44-45页 |
| 2.1.2 启动子的构建和修饰 | 第45页 |
| 2.1.3 启动子介导 Bmp 信号相关成员的克隆构建 | 第45-46页 |
| 2.1.4 其它克隆 | 第46-47页 |
| 2.1.5 本研究构建克隆用到的所有引物序列 | 第47-48页 |
| 2.2 克隆所用的相关实验试剂以及反应条件 | 第48-52页 |
| 2.2.1 PCR 反应体系及条件 | 第48-50页 |
| 2.2.2 酶切反应及去磷酸化 | 第50页 |
| 2.2.3 酶切产物回收连接及后续克隆步骤 | 第50页 |
| 2.2.4 斑马鱼胚胎的基因组提取和 cDNA 制备 | 第50-52页 |
| 2.3 胚胎的显微注射 | 第52-53页 |
| 2.3.1 斑马鱼的培养环境 | 第52页 |
| 2.3.2 显微注射相关材料 | 第52-53页 |
| 2.4 用于显微注射的 mRNA 制备 | 第53-54页 |
| 2.5 用于显微注射的 MO 信息 | 第54-55页 |
| 2.6 整胚原位杂交实验方法及材料 | 第55-58页 |
| 2.6.1 探针合成原理和方法 | 第55-56页 |
| 2.6.2 整胚原位杂交实验试剂 | 第56-57页 |
| 2.6.3 整胚原位杂交实验方法 | 第57-58页 |
| 2.7 免疫荧光实验和共聚焦成像 | 第58-60页 |
| 2.7.1 整胚免疫荧光实验试剂 | 第58页 |
| 2.7.2 整胚免疫荧光实验方法 | 第58-59页 |
| 2.7.3 冰冻切片免疫荧光 | 第59页 |
| 2.7.4 免疫荧光抗体相关信息 | 第59页 |
| 2.7.5 共聚焦成像及图像处理 | 第59-60页 |
| 2.7.6 同一枚胚胎同时检测 mRNA 和蛋白分布的实验方法 | 第60页 |
| 2.8 细胞系和胚胎中荧光素酶报告实验 | 第60-62页 |
| 2.8.1 实验试剂和材料 | 第60-61页 |
| 2.8.2 细胞系中进行荧光素酶检测实验方法 | 第61页 |
| 2.8.3 胚胎中进行荧光素酶检测实验方法 | 第61-62页 |
| 2.8.4 数据处理 | 第62页 |
| 2.9 斑马鱼胚胎蛋白印迹（Western blotting）实验 | 第62-63页 |
| 2.10 胚胎染色质免疫共沉淀（ChIP，Chromatin Immunoprecipitation） | 第63-64页 |
| 2.11 数学模拟中的相关数学方程式 | 第64-67页 |
| 第3章 结果与分析 | 第67-109页 |
| 3.1 内源 Bmp2b 在背部组织中心特异表达且具备信号转导活性 | 第67-74页 |
| 3.1.1 两个不同的 Bmp2b 抗体都能识别内源 Bmp2b | 第67-68页 |
| 3.1.2 Bmp2b-NT 抗体的特异性检测 | 第68-69页 |
| 3.1.3 Bmp2b 蛋白在背部组织中心表达 | 第69-72页 |
| 3.1.4 Bmp 信号可在背部组织中心激活下游效应因子 | 第72-73页 |
| 3.1.5 小结 | 第73-74页 |
| 3.2 背部组织中心特异敲低 Bmp 信号的实验设计 | 第74-78页 |
| 3.2.1 构建 Bmp 配体和受体的突变体 | 第74-75页 |
| 3.2.2 两个特异表达的启动子能在背部组织中心特异敲低 Bmp 信号 | 第75-77页 |
| 3.2.3 小结 | 第77-78页 |
| 3.3 Bmp2b 和 p-Smad1/5/8 的浓度梯度分布需要组织中心 Bmp 信号 | 第78-84页 |
| 3.3.1 敲低背部 Bmp 信号不影响胚盾期前胚胎中 Bmp2b 和 p-Smad1/5/8 浓度梯度水平 | 第78-81页 |
| 3.3.2 特异敲低 os-Bmp2b 下调 Bmp2b 和 p-Smad1/5/8 浓度梯度分布 | 第81-83页 |
| 3.3.3 Chordin 负调控 Bmp2b 和 p-Smad1/5/8 的浓度梯度 | 第83-84页 |
| 3.3.4 小结 | 第84页 |
| 3.4 特异干扰背部 os-Bmp 可扩大 Chordin 蛋白的分布范围 | 第84-89页 |
| 3.4.1 Chd 抗体的有效性检测 | 第84-85页 |
| 3.4.2 Chd 蛋白呈梯度分布且是长距离扩散因子 | 第85-88页 |
| 3.4.3 敲低背部 os-Bmp 促使胚盾期胚胎中 Chd 蛋白的分布范围扩大 | 第88-89页 |
| 3.4.4 小结 | 第89页 |
| 3.5 背部组织中心的 Bmp2b 直接负调控 chd 的转录 | 第89-96页 |
| 3.5.1 os-Bmp2b 抑制 chd 基因转录 | 第89-90页 |
| 3.5.2 chd 启动子具备背部特异性转录活性且能响应 Bmp 信号 | 第90-91页 |
| 3.5.3 0.235-kb chd 启动子片段能响应 Bmp 信号 | 第91-92页 |
| 3.5.4 0.235-kb chd 启动子片段含有 Smad1/5 结合位点 | 第92-95页 |
| 3.5.5 Smad1/5 可直接结合在 0.235-kb chd 启动子上 | 第95页 |
| 3.5.6 小结 | 第95-96页 |
| 3.6 os-Bmp2b 是胚胎正常背腹分化所必需的 | 第96-100页 |
| 3.6.1 特异减弱或者增强背部组织中心 Bmp 信号能导致不同的表型 | 第96-97页 |
| 3.6.2 特异干扰背部组织中心 Bmp 信号可以改变原肠胚的背腹图式 | 第97-98页 |
| 3.6.3 敲低 os-Bmp2b 引起的标记基因改变可被背部过表达 Bmp2b 拯救 | 第98-99页 |
| 3.6.4 同时敲低 os-Bmp2b 不能拯救 chd-MO 引起的腹部化表型 | 第99-100页 |
| 3.6.5 小结 | 第100页 |
| 3.7 依赖 os-Bmp 信号的 Bmp 浓度梯度“反应-扩散”动力学模型 | 第100-106页 |
| 3.7.1 数学模拟的相关参数设置 | 第100-102页 |
| 3.7.2 数学模拟反映了 os-Bmp 对整体 Bmp 浓度梯度形成具有重要作用 | 第102-105页 |
| 3.7.3 Chd 的远距离作用不依赖于它的扩散系数 | 第105-106页 |
| 3.7.4 小结 | 第106页 |
| 3.8 结论 | 第106-109页 |
| 第4章 讨论和展望 | 第109-114页 |
| 4.1 背部组织中心表达 Bmp2b 的必要性 | 第109页 |
| 4.2 os-Bmp2b 可能促进 Chd 蛋白降解 | 第109-111页 |
| 4.3 敲低 admp 对 Chd 的蛋白水平没有影响 | 第111-112页 |
| 4.4 敲低 os-Bmp 信号下调腹部和侧部区域中 bmp2b 的转录水平 | 第112-113页 |
| 4.5 本研究的意义 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第126页 |
