中文摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
前言 | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-31页 |
1.1 心血管疾病及其治疗 | 第14-15页 |
1.1.1 心血管疾病 | 第14页 |
1.1.2 心血管疾病的预防与治疗 | 第14-15页 |
1.2 人工血管 | 第15-17页 |
1.2.1 人工血管基材 | 第15页 |
1.2.2 人工血管表面改性 | 第15-17页 |
1.2.2.1 人工血管表面物理改性 | 第16页 |
1.2.2.2 天然生物材料共混改性 | 第16页 |
1.2.2.3 人工血管表面化学改性 | 第16-17页 |
1.2.2.4 生物工程改性 | 第17页 |
1.3 基因和细胞因子修饰人工血管 | 第17-18页 |
1.3.1 细胞因子和基因 | 第17页 |
1.3.2 基因用于人工血管改性 | 第17-18页 |
1.3.3 ZNF580 基因 | 第18页 |
1.4 基因治疗及基因载体 | 第18-29页 |
1.4.1 基因治疗 | 第18-19页 |
1.4.2 基因载体 | 第19-26页 |
1.4.2.1 病毒型基因载体 | 第20页 |
1.4.2.2 非病毒型基因载体 | 第20-26页 |
1.4.2.2.1 阳离子脂质体基因载体 | 第21-22页 |
1.4.2.2.2 层层自组装基因传递系统 | 第22页 |
1.4.2.2.3 阳离子聚合物基因载体 | 第22-26页 |
1.4.3 聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)基因载体 | 第26-29页 |
1.4.3.1 PEI | 第26-27页 |
1.4.3.2 PEI 非病毒基因载体 | 第27-29页 |
1.5 本论文的研究目的及内容 | 第29-31页 |
第二章 以 mPEG-b-P(MMD-co-GA)-g-PEI 为基材的 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物促进 HUVECs 增殖与迁移 | 第31-56页 |
2.1 引言 | 第31-32页 |
2.2 实验部分 | 第32-40页 |
2.2.1 实验原料与仪器 | 第32-35页 |
2.2.1.1 实验原料和试剂 | 第32-33页 |
2.2.1.2 主要实验仪器 | 第33-35页 |
2.2.2 两亲性三嵌段共聚物 mPEG-b-P(MMD-co-GA)-g-PEI 的合成 | 第35页 |
2.2.2.1 两嵌段共聚物 mPEG-b-P(MMD-co-GA)的合成 | 第35页 |
2.2.2.2 三嵌段共聚物 mPEG-b-P(MMD-co-GA)-g-PEI 的合成 | 第35页 |
2.2.3 共聚物的表征 | 第35-36页 |
2.2.4 临界胶束浓度(CMC)测定 | 第36页 |
2.2.5 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的制备和表征 | 第36-38页 |
2.2.5.1 MPs 的制备 | 第36页 |
2.2.5.2 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的制备 | 第36-37页 |
2.2.5.3 粒径分布和 zeta 电位 | 第37页 |
2.2.5.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第37页 |
2.2.5.5 质粒 pEGFP-ZNF580 体外释放试验 | 第37页 |
2.2.5.6 MPs 及 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的形貌观察 | 第37-38页 |
2.2.6 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物细胞转染及细胞毒性 | 第38-39页 |
2.2.6.1 细胞培养 | 第38页 |
2.2.6.2 体外转染试验 | 第38页 |
2.2.6.3 细胞毒性试验 | 第38-39页 |
2.2.7 蛋白提取及 western blot 分析 | 第39页 |
2.2.8 划痕实验 | 第39-40页 |
2.3 结果与讨论 | 第40-55页 |
2.3.1 两亲性三嵌段 mPEG-b-P(MMD-co-GA)-g-PEI 共聚物的合成 | 第40-43页 |
2.3.2 MPs 表征 | 第43-49页 |
2.3.2.1 CMC 值测定 | 第43-44页 |
2.3.2.2 MPs 和 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的形貌 | 第44-47页 |
2.3.2.3 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第47-48页 |
2.3.2.4 体外释放试验 | 第48-49页 |
2.3.3 细胞转染和细胞毒性 | 第49-53页 |
2.3.3.1 体外转染 | 第49-51页 |
2.3.3.2 体外细胞毒性试验 | 第51-53页 |
2.3.4 细胞迁移 | 第53-55页 |
2.4 本章小结 | 第55-56页 |
第三章 可降解 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物促进 HUVECs 增殖和迁移 | 第56-85页 |
3.1 引言 | 第56页 |
3.2 材料和方法 | 第56-61页 |
3.2.1 实验原料和仪器 | 第56-58页 |
3.2.1.1 实验原料和试剂 | 第56-58页 |
3.2.1.2 主要实验仪器 | 第58页 |
3.2.2 两亲性三嵌段共聚物的合成 | 第58-59页 |
3.2.2.1 两嵌段共聚物 | 第58页 |
3.2.2.2 两亲性三嵌段共聚物 | 第58-59页 |
3.2.3 聚合物表征 | 第59页 |
3.2.4 三嵌段共聚物的生物降解 | 第59页 |
3.2.5 临界胶束浓度 | 第59页 |
3.2.6 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的准备和表征 | 第59-60页 |
3.2.6.1 MPs 制备 | 第59-60页 |
3.2.6.2 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的制备 | 第60页 |
3.2.6.3 粒径分布和 zeta 电位 | 第60页 |
3.2.6.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第60页 |
3.2.6.5 体外核酸释放 | 第60页 |
3.2.6.6 形貌 | 第60页 |
3.2.7 细胞转染和细胞毒性 | 第60-61页 |
3.2.7.1 细胞培养 | 第60页 |
3.2.7.2 体外转染试验 | 第60-61页 |
3.2.7.3 蛋白提取和 western blot 分析 | 第61页 |
3.2.7.4 体外细胞毒性 | 第61页 |
3.2.8 细胞划痕试验 | 第61页 |
3.3 结果与讨论 | 第61-84页 |
3.3.1 两亲性三嵌段共聚物的合成 | 第61-66页 |
3.3.2 共聚物表征 | 第66-75页 |
3.3.2.1 两亲性三嵌段共聚物的降解行为 | 第66-67页 |
3.3.2.2 三嵌段共聚物的 CMC 值 | 第67-68页 |
3.3.2.3 MPs 和 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的形貌研究 | 第68-73页 |
3.3.2.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第73-74页 |
3.3.2.5 体外释放试验 | 第74-75页 |
3.3.3 细胞转染和细胞毒性 | 第75-81页 |
3.3.3.1 细胞转染体外试验 | 第75-79页 |
3.3.3.2 细胞毒性体外试验 | 第79-81页 |
3.3.4 细胞迁移试验 | 第81-84页 |
3.4 本章小结 | 第84-85页 |
第四章 靶向性 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物促进 HUVECs 增殖和迁移 | 第85-117页 |
4.1 引言 | 第85-86页 |
4.2 材料和方法 | 第86-92页 |
4.2.1 材料和仪器 | 第86-88页 |
4.2.1.1 主要原料和试剂 | 第86-88页 |
4.2.1.2 主要实验仪器 | 第88页 |
4.2.2 三嵌段共聚物合成 | 第88-90页 |
4.2.2.1 P(LA-co-GA)和 P(LA-co-GA-co-MMD)共聚物 | 第88-89页 |
4.2.2.2 三嵌段共聚物 | 第89页 |
4.2.2.3 三嵌段共聚物接枝 REDV 多肽 | 第89-90页 |
4.2.3 聚合物表征 | 第90页 |
4.2.4 接枝多肽表征 | 第90页 |
4.2.5 共聚物的降解行为 | 第90页 |
4.2.6 MPs/pPEGFP-ZNF580 复合物的制备和表征 | 第90-91页 |
4.2.6.1 MPs 制备 | 第90页 |
4.2.6.2 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的制备 | 第90页 |
4.2.6.3 粒径分布及 zeta 电位 | 第90页 |
4.2.6.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第90-91页 |
4.2.6.5 核酸体外释放 | 第91页 |
4.2.6.6 MPs 和 MPs/pEGFP-ZNF580 形貌 | 第91页 |
4.2.7 体外转染和细胞毒性 | 第91页 |
4.2.7.1 细胞培养 | 第91页 |
4.2.7.2 体外转染试验 | 第91页 |
4.2.7.3 蛋白提取及 western blot | 第91页 |
4.2.7.4 体外细胞毒性 | 第91页 |
4.2.8 细胞划痕试验 | 第91页 |
4.2.9 Transwell 迁移试验 | 第91-92页 |
4.2.10 HUVECs 和 HUASMCs 共培养体系的免疫荧光染色 | 第92页 |
4.3 结果与讨论 | 第92-116页 |
4.3.1 两亲性三嵌段共聚物的合成 | 第92-98页 |
4.3.2 共聚物表征 | 第98-106页 |
4.3.2.1 两亲性三嵌段共聚物的体外降解 | 第98-100页 |
4.3.2.2 MPs 和 MPs/pEGFP-ZNF580 复合物的形貌 | 第100-102页 |
4.3.2.3 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第102-104页 |
4.3.2.4 体外核酸释放试验 | 第104-106页 |
4.3.3 细胞转染和细胞毒性 | 第106-110页 |
4.3.3.1 体外细胞转染试验 | 第106-108页 |
4.3.3.2 蛋白提取及 western blot 分析 | 第108-109页 |
4.3.3.3 体外细胞毒性 | 第109-110页 |
4.3.4 细胞迁移试验 | 第110-112页 |
4.3.5 Transwell 迁移试验 | 第112-113页 |
4.3.6 HUVECs 和 HUASMCs 共培养 | 第113-116页 |
4.4 本章小结 | 第116-117页 |
第五章 结论 | 第117-118页 |
参考文献 | 第118-136页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第136-137页 |
致谢 | 第137页 |