| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第10-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 单克隆抗体 | 第14-16页 |
| 1.2 哺乳动物细胞表达系统 | 第16-18页 |
| 1.3 GC-rich载体在哺乳动物细胞表达系统中的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 抗体定点偶联小分子药物 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究主要创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 GC-rich载体用于提高CHO细胞表达全人源抗CD20抗体2F2的研究 | 第21-48页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料及基本操作 | 第22-30页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 实验菌株和细胞 | 第22页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.4 相关溶液的配制 | 第23-28页 |
| 2.2.5 基本操作 | 第28-30页 |
| 2.3 实验步骤与方法 | 第30-40页 |
| 2.3.1 重组表达质粒pMH3-H和pMH3-L的构建 | 第30-38页 |
| 2.3.2 脂质体转染CHO细胞 | 第38-39页 |
| 2.3.3 药物筛选与稳定单克隆株挑取 | 第39页 |
| 2.3.4 CHO(2F2)的贴壁表达与纯化 | 第39-40页 |
| 2.4 实验结果 | 第40-46页 |
| 2.4.1 真核表达载体构建 | 第40-42页 |
| 2.4.2 脂质体转染实验 | 第42页 |
| 2.4.3 单克隆筛选实验 | 第42-44页 |
| 2.4.4 GC-rich(+)真核表达载体与GC-rich(-)真核表达载体的比较 | 第44-45页 |
| 2.4.5 抗CD20抗体2F2的表达与纯化 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 重组CHO细胞的无血清悬浮培养 | 第48-63页 |
| 3.1 前言 | 第48-49页 |
| 3.2 实验仪器和实验试剂 | 第49-55页 |
| 3.2.1 细胞和试剂 | 第49页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第49-50页 |
| 3.2.3 相关溶液配制 | 第50-53页 |
| 3.2.4 基础操作 | 第53-55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-57页 |
| 3.3.1 重组CHO细胞无血清驯化和悬浮培养 | 第55-56页 |
| 3.3.2 摇瓶培养 | 第56页 |
| 3.3.3 摇瓶批次补料培养 | 第56-57页 |
| 3.3.4 生物反应器批次补料培养 | 第57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-62页 |
| 3.4.1 重组CHO细胞的无血清驯化与摇瓶表达 | 第57-60页 |
| 3.4.2 摇瓶批次补料表达 | 第60-61页 |
| 3.4.3 5-L生物反应器批次补料表达 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-63页 |
| 第四章 抗CD20抗体定点偶联小分子药物MMAE | 第63-80页 |
| 4.1 前言 | 第63-64页 |
| 4.2 实验材料及基本操作 | 第64-65页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第64页 |
| 4.2.2 实验菌株和细胞 | 第64页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第64-65页 |
| 4.2.4 相关溶液的配制 | 第65页 |
| 4.2.5 基本操作 | 第65页 |
| 4.3 实验步骤和方法 | 第65-72页 |
| 4.3.1 构建表达质粒pMH3-LV205C和pMH3-HA123C | 第67-70页 |
| 4.3.2 脂质体转染CHO细胞 | 第70页 |
| 4.3.3 药物筛选与稳定单克隆株挑取 | 第70页 |
| 4.3.4 CHO(HLM)的贴壁表达与纯化 | 第70-71页 |
| 4.3.5 抗体HLM与小分子药物vcMMAE偶联 | 第71页 |
| 4.3.6 流式细胞仪检测2F2,HLM及HLM-vcMMAE的亲和性 | 第71页 |
| 4.3.7 细胞毒性检测 | 第71-72页 |
| 4.4 实验结果 | 第72-79页 |
| 4.4.1 点突变 | 第72-73页 |
| 4.4.2 细胞转染与克隆筛选 | 第73-74页 |
| 4.4.3 抗体HLM表达与纯化 | 第74页 |
| 4.4.4 抗体偶联物HLM-vcMMAE的合成 | 第74-79页 |
| 4.5 讨论 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 综述：抗体在CHO细胞内的高表达策略 | 第87-103页 |
| References | 第99-103页 |
| 作者简历及在读期间主要研究成果 | 第103页 |
