| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-26页 |
| 1.1 禽呼肠孤病毒及其防控研究的进展 | 第15-21页 |
| 1.1.1 禽呼肠孤病毒的特点 | 第15页 |
| 1.1.2 禽呼肠孤病毒的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.3 禽呼肠孤病毒结构的特征 | 第16-17页 |
| 1.1.4 ARV主要蛋白及功能 | 第17-19页 |
| 1.1.5 ARV疫苗研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2 杆状病毒载体-昆虫细胞表达系统的简述 | 第21-24页 |
| 1.2.1 表达载体——杆状病毒 | 第21-22页 |
| 1.2.2 表达受体——昆虫细胞系 | 第22页 |
| 1.2.3 BVES的应用概况 | 第22-24页 |
| 1.2.4 小结 | 第24页 |
| 1.3 本课题的研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 禽呼肠孤病毒在LMH、Vero、DF-1上的增殖规律 | 第26-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-27页 |
| 2.1.1 材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.2 ARV感染LMH、Vero、DF-1细胞 | 第28页 |
| 2.2.3 RT-PCR检测 | 第28-30页 |
| 2.2.4 病毒一步生长曲线的绘制 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-35页 |
| 2.3.1 细胞形态学检测 | 第30-32页 |
| 2.3.2 RT-PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.3.3 ARV在LMH、Vero、DF-1细胞系上的生长曲线 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 禽呼肠孤病毒σB-pFast HTB、σC-pFast Dual重组载体及rBacmid重组病毒载体的构建 | 第36-53页 |
| 3.1 材料 | 第36-39页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试验仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.4 常用试剂配制 | 第38-39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 技术路线 | 第39页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第39-40页 |
| 3.2.3 ARV cDNA的获取 | 第40-42页 |
| 3.2.4 σB、σC基因的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 3.2.5 σ-B-pMD-18T、σC-pMD-18T质粒的获得 | 第43-45页 |
| 3.2.6 pFast HTB质粒和pFast Dual质粒的获取 | 第45页 |
| 3.2.7 重组质粒σB-pFast HTB、σC-pFast Dua的获取 | 第45-46页 |
| 3.2.8 重组杆状病毒rBacmid载体的构建 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-51页 |
| 3.3.1 σB、σC基因的PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| 3.3.2 σB、σC基因连接pMD-18T载体 | 第47页 |
| 3.3.3 重组载体σB-pFast HTB构建结果 | 第47-49页 |
| 3.3.4 重组载体σC-pFast Dual构建结果 | 第49-50页 |
| 3.3.5 重组质粒σB-pFast HTB、σC-pFast Dual的双酶切验证 | 第50-51页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 ARV重组杆状病毒BacSC-σB、BacSC-σC的获得 | 第53-60页 |
| 4.1 材料 | 第53-55页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试验仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.2 试验方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 技术路线 | 第55页 |
| 4.2.2 Sf9细胞的培养 | 第55页 |
| 4.2.3 转染Sf9昆虫细胞 | 第55页 |
| 4.2.4 细胞毒株P1代的扩增 | 第55-56页 |
| 4.2.5 DNA水平检测重组病毒 | 第56页 |
| 4.2.6 mRNA水平检测重组病毒的转录 | 第56页 |
| 4.2.7 重组病毒滴度的测定 | 第56-57页 |
| 4.3 试验结果 | 第57-59页 |
| 4.3.1 重组杆状病毒细胞形态学检测 | 第57页 |
| 4.3.2 重组杆状病毒DNA检测 | 第57-58页 |
| 4.3.3 重组杆状病毒转录的mRNA检测 | 第58-59页 |
| 4.3.4 重组杆状病毒液的滴度 | 第59页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 重组蛋白的制备及功能验证 | 第60-68页 |
| 5.1 材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第60页 |
| 5.1.2 主要试验仪器 | 第60-61页 |
| 5.2 试验方法 | 第61-64页 |
| 5.2.1 技术路线 | 第61-62页 |
| 5.2.2 ARV阳性血清的制备 | 第62-63页 |
| 5.2.3 ARV重组蛋白的制备 | 第63页 |
| 5.2.4 ARV重组蛋白的功能验证 | 第63-64页 |
| 5.3 结果 | 第64-67页 |
| 5.3.1 ARV血清的ELISA检测 | 第65页 |
| 5.3.2 SDS-PAGE检测 | 第65-66页 |
| 5.3.3 IFA检测 | 第66页 |
| 5.3.4 Western blot检测 | 第66-67页 |
| 5.4 分析与讨论 | 第67-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77页 |
