| 关于研究生学位论文资助项目的说明 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 不育技术在有害生物防治中的提出 | 第12-13页 |
| 1.2 不育剂的种类 | 第13页 |
| 1.3 免疫不育机制 | 第13-14页 |
| 1.4 卵透明带（ZP）抗原 | 第14-17页 |
| 1.4.1 ZP 蛋白质的组成和结构 | 第15-16页 |
| 1.4.2 ZP3 的生物活性 | 第16页 |
| 1.4.3 ZP3 的免疫原性 | 第16-17页 |
| 1.5 卵透明带（ZP）免疫不育研究进展 | 第17-18页 |
| 1.6 蛋白表达系统 | 第18-21页 |
| 1.6.1 大肠杆菌原核表达系统 | 第18-20页 |
| 1.6.2 CHO 细胞真核表达系统 | 第20-21页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第21页 |
| 1.8 本研究的主要内容 | 第21-23页 |
| 1.8.1 草兔卵透明带 3（ZP3）的克隆 | 第21页 |
| 1.8.2 ZP3 原核表达载体的构建及表达 | 第21-22页 |
| 1.8.3 ZP3 真核表达载体的构建及表达 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-45页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 菌种、哺乳动物细胞与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 其他试验试剂及耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-45页 |
| 2.2.1 草兔卵巢的解剖及总 RNA 的提取 | 第25-29页 |
| 2.2.1.1 草兔卵巢的解剖 | 第25-27页 |
| 2.2.1.2 草兔卵巢总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.1.3 草兔卵巢总 RNA 的检测 | 第28-29页 |
| 2.2.1.4 总 RNA 杂 DNA 消化 | 第29页 |
| 2.2.2 草兔卵透明带 3（ZP3）的反转录及克隆测序 | 第29-33页 |
| 2.2.3 草兔卵透明带 3（ZP3）原核表达载体 PET-28a（+）-ZP3 的构建及鉴定 | 第33-37页 |
| 2.2.4 草兔卵透明带 3（ZP3）原核表达载体的诱导及表达条件优化 | 第37-39页 |
| 2.2.5 草兔卵透明带 3（ZP3）真核表达载体 pEGFP-N1-ZP3 的构建、鉴定及大量制备 | 第39-42页 |
| 2.2.6 真核哺乳动物细胞的培养及草兔真核表达载体 pEGFP-N1-ZP3 的转染及表达 | 第42-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-59页 |
| 3.1 草兔总 RNA 的提取 | 第45页 |
| 3.2 草兔卵透明带 3（ZP3）基因的克隆 | 第45-46页 |
| 3.3 草兔卵透明带 3（ZP3）核心片段原核表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.3.1 引入酶切位点的克隆载体构建 | 第46-47页 |
| 3.3.2 原核表达载体 pET-28a（+）-ZP3 的构建 | 第47-49页 |
| 3.4 草兔卵透明带 3（ZP3）原核表达载体的诱导表达及条件优化 | 第49-53页 |
| 3.4.1 原核表达载体的诱导 | 第49-51页 |
| 3.4.2 原核表达载体的诱导条件优化 | 第51-53页 |
| 3.4.3 原核表达蛋白产物可溶性分析 | 第53页 |
| 3.5 草兔卵透明带 3（ZP3）真核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.6 RK-13 细胞的转染 | 第54-55页 |
| 3.7 中国仓鼠卵巢细胞（CHO）的转染 | 第55-59页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第59-62页 |
| 4.1 讨论 | 第59-61页 |
| 4.1.1 草兔 ZP3 基因的原核表达 | 第59-60页 |
| 4.1.2 草兔 ZP3 基因的真核表达 | 第60页 |
| 4.1.3 综合分析 | 第60-61页 |
| 4.2 结论 | 第61-62页 |
| 4.2.1 草兔 ZP3 基因原核表达载体 pET-28a（+）的构建、表达及优化 | 第61页 |
| 4.2.2 草兔 ZP3 基因真核表达载体 pEGFP-N1 的构建及 RK-13 细胞和 CHO 细胞的转染 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
