| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第15-32页 |
| 1.1 辐射及其生物学效应 | 第15-16页 |
| 1.2 线粒体的辐射损伤 | 第16-19页 |
| 1.2.1 电离辐射与线粒体DNA损伤 | 第17-18页 |
| 1.2.2 电离辐射对能量代谢的影响 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 氧化磷酸化与能量储存 | 第18页 |
| 1.2.2.2 辐射对氧化磷酸化抑制的作用特点 | 第18-19页 |
| 1.2.2.3 辐射对氧化磷酸化抑制的作用机理 | 第19页 |
| 1.3 斑马鱼在空间放射生物学中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 放射性肺损伤 | 第20-23页 |
| 1.5 电离辐射对造血系统和免疫系统的影响 | 第23-24页 |
| 1.5.1 造血系统辐射损伤 | 第23-24页 |
| 1.5.2 免疫系统辐射损伤 | 第24页 |
| 1.6 电离辐射与MMP9的基因表达 | 第24-25页 |
| 1.7 伊洛马司他的研究现状 | 第25-26页 |
| 1.8 常见的辐射防护或治疗措施 | 第26-30页 |
| 1.8.1 小分子化合物 | 第27-28页 |
| 1.8.2 蛋白类药物 | 第28页 |
| 1.8.3 细胞治疗 | 第28-29页 |
| 1.8.4 辐射防护剂的分子机理 | 第29-30页 |
| 1.8.4.1 自由基的清除 | 第29页 |
| 1.8.4.2 氧化应激的防御 | 第29-30页 |
| 1.8.4.3 通过信号转导降低细胞辐射敏感性 | 第30页 |
| 1.9 本文的研究目的及拟解决的问题 | 第30-32页 |
| 第2章 基于模式生物斑马鱼的辐射易感基因筛选 | 第32-58页 |
| 2.1 前言 | 第32-33页 |
| 2.2 药品与试剂 | 第33-34页 |
| 2.3 仪器设备 | 第34页 |
| 2.4 实验动物 | 第34页 |
| 2.5 质子束照射斑马鱼胚胎 | 第34-35页 |
| 2.5.1 孵化率、死亡率和畸形率的测定 | 第35页 |
| 2.5.2 神经丘毛细胞损伤检测 | 第35页 |
| 2.5.3 qPCR法测定辐射后斑马鱼胚胎的线粒体拷贝数 | 第35页 |
| 2.6 RT-QPCR法测定斑马鱼线粒体功能相关基因的表达 | 第35-37页 |
| 2.7 斑马鱼胚胎线粒体能量代谢分析 | 第37-38页 |
| 2.8 基因芯片实验流程及原理 | 第38-40页 |
| 2.9 明胶酶谱检测 | 第40-42页 |
| 2.10 统计学分析 | 第42页 |
| 2.11 实验结果 | 第42-49页 |
| 2.11.1 质子辐射对斑马鱼胚胎的发育毒性 | 第42-49页 |
| 2.11.1.1 质子辐射对斑马鱼胚胎孵化率的影响 | 第42-43页 |
| 2.11.1.2 质子辐射对斑马鱼胚胎死亡率的影响 | 第43-44页 |
| 2.11.1.3 质子束辐射对斑马鱼畸形率的影响 | 第44-45页 |
| 2.11.1.4 质子束辐射对斑马鱼幼鱼神经丘毛细胞发育的影响 | 第45-46页 |
| 2.11.1.5 质子束辐射对斑马鱼胚胎线粒体含量的影响 | 第46-47页 |
| 2.11.1.6 质子束辐射对斑马鱼线粒体功能相关基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.11.1.7 不同剂量质子束辐射对斑马鱼线粒体能量代谢的影响 | 第48-49页 |
| 2.12 斑马鱼质子辐照后基因芯片数据分析 | 第49-55页 |
| 2.12.1 Pathway富集分析 | 第49-50页 |
| 2.12.2 GO功能分析 | 第50-54页 |
| 2.12.3 差异表达基因的验证筛选 | 第54-55页 |
| 2.13 讨论 | 第55-58页 |
| 第3章 伊洛马司他对放射性肺损伤的保护作用研究 | 第58-91页 |
| 3.1 前言 | 第58-62页 |
| 3.2 材料与方法 | 第62-73页 |
| 3.2.1 主要试剂与耗材 | 第62-63页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第63页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第63-69页 |
| 3.2.3.1 FRET法检测蛋白酶活性 | 第63-64页 |
| 3.2.3.2 半定量PCR检测基因表达 | 第64-65页 |
| 3.2.3.3 实验动物 | 第65页 |
| 3.2.3.4 Ilomastat注射液的配制 | 第65页 |
| 3.2.3.5 小鼠放射性肺损伤早期模型的建立及药物处理 | 第65-66页 |
| 3.2.3.6 组织石蜡包埋切片 | 第66页 |
| 3.2.3.7 HE染色 | 第66页 |
| 3.2.3.8 Masson染色 | 第66-67页 |
| 3.2.3.9 TUNEL实验步骤 | 第67页 |
| 3.2.3.10 羟脯氨酸含量测定 | 第67-68页 |
| 3.2.3.11 免疫组化 | 第68-69页 |
| 3.2.3.12 透射电子显微镜 | 第69页 |
| 3.2.4 细胞培养 | 第69-72页 |
| 3.2.4.1 细胞复苏 | 第69页 |
| 3.2.4.2 细胞培养 | 第69-70页 |
| 3.2.4.3 细胞传代 | 第70页 |
| 3.2.4.4 MTT法检测细胞活性 | 第70页 |
| 3.2.4.5 细胞内ROS检测 | 第70-71页 |
| 3.2.4.6 Long-extensionPCR检测mtDNA损伤 | 第71-72页 |
| 3.2.4.7 JC-1检测线粒体膜电势 | 第72页 |
| 3.2.4.8 克隆形成实验 | 第72页 |
| 3.2.5 统计学分析 | 第72-73页 |
| 3.3 实验结果 | 第73-87页 |
| 3.3.1 Ilomastat抑制辐射诱导的MMPs活性上升 | 第73-74页 |
| 3.3.2 Ilomastat抑制MMP2和MMP9的表达 | 第74-76页 |
| 3.3.3 Ilomastat减轻辐射诱导的肺炎 | 第76-78页 |
| 3.3.4 Ilomastat减轻辐射导致的肺组织炎性细胞浸润 | 第78-79页 |
| 3.3.5 Ilomastat减轻辐射诱导的肺纤维化 | 第79-80页 |
| 3.3.6 Ilomastat预处理降低了肺组织中炎性细胞因子的含量 | 第80-82页 |
| 3.3.7 Ilomastat抑制辐射诱导的肺细胞凋亡 | 第82-83页 |
| 3.3.8 Ilomastat保护小鼠肺泡二型细胞的板层小体和线粒体结构的完整性 | 第83-84页 |
| 3.3.9 Ilomastat预处理增加小鼠的存活 | 第84-85页 |
| 3.3.10 Ilomastat减少A549细胞线粒体的损伤和增加细胞的存活 | 第85-87页 |
| 3.4 讨论 | 第87-91页 |
| 第4章 ILOMASTAT对小鼠造血和免疫系统的保护作用研究 | 第91-121页 |
| 4.1 前言 | 第91-92页 |
| 4.2 材料与方法 | 第92-94页 |
| 4.2.1 药品与试剂 | 第92-93页 |
| 4.2.2 流式分析相关试剂 | 第93-94页 |
| 4.3 主要仪器 | 第94-95页 |
| 4.4 实验内容 | 第95-100页 |
| 4.4.1 小鼠 | 第95页 |
| 4.4.2 Ilomastat注射液的配制 | 第95页 |
| 4.4.3 小鼠全身辐照30天存活率及平均存活时间测定 | 第95页 |
| 4.4.4 外周血细胞计数 | 第95-96页 |
| 4.4.5 脾集落形成单位(CFU-s)计数 | 第96页 |
| 4.4.6 骨髓单核细胞(BMMCs)的分离 | 第96页 |
| 4.4.7 造血干细胞和造血祖细胞的分群 | 第96-98页 |
| 4.4.8 流式细胞仪分析细胞周期变化 | 第98页 |
| 4.4.9 免疫、造血器官的分析检测 | 第98-99页 |
| 4.4.9.1 脾脏指数测定 | 第98页 |
| 4.4.9.2 脾脏和骨髓组织病理学检查 | 第98-99页 |
| 4.4.10 小鼠淋巴细胞亚群标记检测方法 | 第99-100页 |
| 4.4.11 统计学分析 | 第100页 |
| 4.5 结果 | 第100-118页 |
| 4.5.1 全身受辐射小鼠30d存活率及平均存活时间测定 | 第100-101页 |
| 4.5.2 低剂量Ilomastat预处理增加全身辐射后小鼠的存活 | 第101页 |
| 4.5.3 Ilomastat辐射后用药增加小鼠的存活 | 第101-104页 |
| 4.5.4 Ilomastat对放射诱导的造血和免疫系统损伤的保护作用 | 第104-106页 |
| 4.5.4.1 外周血白细胞和血小板计数 | 第104页 |
| 4.5.4.2 外周血红细胞计数和血红蛋白含量测定 | 第104页 |
| 4.5.4.3 外周血淋巴细胞计数 | 第104-105页 |
| 4.5.4.4 外周血中的血小板和中性粒细胞计数 | 第105-106页 |
| 4.5.5 不同的Ilomastat给药方式可以促进辐射后小鼠外周血的恢复 | 第106-107页 |
| 4.5.6 辐射后Ilomastat用药也能够促进血相指数的恢复 | 第107-108页 |
| 4.5.7 Ilomastat预处理增加受辐射小鼠的体重 | 第108-109页 |
| 4.5.8 Ilomastat预处理减少血清中TNF-?、TGF-?1和增加SCF细胞因子的含量 | 第109-110页 |
| 4.5.9 Ilomastat预处理改善骨髓细胞群体的恢复 | 第110-112页 |
| 4.5.10 Ilomastat增强骨髓细胞的增殖 | 第112-113页 |
| 4.5.11 Ilomastat促进辐射后造血干细胞和祖细胞的恢复 | 第113-114页 |
| 4.5.12 Ilomastat刺激脾脏前体细胞的修复、保障脾脏结构的完整性.. | 第114-116页 |
| 4.5.13 Ilomastat对脾脏T淋巴细胞CD4、CD8亚群和B细胞的影响 | 第116-118页 |
| 4.6 讨论 | 第118-121页 |
| 第5章 结论与展望 | 第121-125页 |
| 5.1 结论 | 第121-122页 |
| 5.2 展望 | 第122-125页 |
| 参考文献 | 第125-147页 |
| 附录 | 第147-151页 |
| 致谢 | 第151-153页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第153-156页 |
| 作者简历 | 第153页 |
| 参加的研究项目及获奖情况 | 第153-154页 |
| 发表文章 | 第154-156页 |
