| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 脯氨酸研究现状 | 第11页 |
| 1.2 植物基因克隆 | 第11-13页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第12页 |
| 1.2.2 基因文库法 | 第12页 |
| 1.2.3 计算机克隆法 | 第12页 |
| 1.2.4 PCR扩增法 | 第12-13页 |
| 1.2.5 蛋白质工程法 | 第13页 |
| 1.3 植物P5CS基因克隆的研究现状 | 第13-16页 |
| 1.3.1 植物P5CS基因的结构特点 | 第13页 |
| 1.3.2 P5CS基因的作用 | 第13-14页 |
| 1.3.3 植物P5CS基因在抗逆基因工程中的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.4 植物P5CS基因的克隆与表达研究 | 第15-16页 |
| 1.4 “围选1号”简介 | 第16-17页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第17页 |
| 1.6 研究内容 | 第17-18页 |
| 1.7 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 仁用杏“围选1号”P5CS基因的克隆 | 第19-36页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂及试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.3 实验仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.4 菌株及载体 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 仁用杏P5CS核心片段的克隆 | 第20-23页 |
| 2.2.2 带同源序列的P5CS的克隆 | 第23-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-35页 |
| 2.3.1 “围选1号”叶片RNA的提取 | 第25页 |
| 2.3.2 “围选1号”PSCS基因片段克隆 | 第25-27页 |
| 2.3.3 “围选1号”P5CS基因的生物信息学分析 | 第27-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 P5CS基因差异表达分析 | 第36-40页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器设备 | 第36页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 实验仪器设备 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 3.2.1 样品处理 | 第36-37页 |
| 3.2.2 第一链反转录 | 第37页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 P5CS基因的组织器官特异性表达模式分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 P5CS基因在低温胁迫条件下的表达模式分析 | 第38-39页 |
| 3.4 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 转P5CS基因的酵母抗逆性分析 | 第40-46页 |
| 4.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.1 载体与菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 酵母表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 4.2.2 重组质粒与pYES2质粒的酵母转化与鉴定 | 第42页 |
| 4.2.3 重组酵母的胁迫实验 | 第42-43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-45页 |
| 4.3.1 酵母表达载体与重组子的获得 | 第43-44页 |
| 4.3.2 酵母转化子的鉴定 | 第44页 |
| 4.3.3 重组酵母的抗性分析 | 第44-45页 |
| 4.4 小结 | 第45-46页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第46-50页 |
| 5.1 结论 | 第46页 |
| 5.2 讨论 | 第46-49页 |
| 5.2.1 “围选1号”叶片RNA提取时常出现的问题 | 第46-47页 |
| 5.2.2 “围选1号”P5CS基因克隆时出现的问题 | 第47-48页 |
| 5.2.3 “围选1号”P5CS基因克隆时载体与片段的连接 | 第48页 |
| 5.2.4 关于P5CS基因的序列分析 | 第48页 |
| 5.2.5 关于P5CS基因差异表达分析 | 第48-49页 |
| 5.2.6 酵母抗逆性分析 | 第49页 |
| 5.3 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
