| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 乙型脑炎病毒的病原学特征 | 第14页 |
| 2 乙型脑炎病毒的分子生物学特征 | 第14-16页 |
| 2.1 结构蛋白 | 第15页 |
| 2.2 非结构蛋白 | 第15-16页 |
| 3 乙型脑炎病毒的流行病学特征 | 第16-17页 |
| 4 乙型脑炎病毒基因型分布特点 | 第17-18页 |
| 5 乙型脑炎疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
| 5.1 灭活苗 | 第18页 |
| 5.2 减毒活疫苗 | 第18-19页 |
| 5.3 基因工程苗 | 第19页 |
| 6 乙型脑炎病毒毒力基因研究进展 | 第19-22页 |
| 7 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第一章 基因Ⅰ型乙型脑炎病毒减毒株选育 | 第23-51页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1 生物材料 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 1.4 试剂的配制 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-37页 |
| 2.1 BHK-21细胞的复苏与传代培养 | 第25-26页 |
| 2.2 病毒初始接种量和病毒收获时间的优化 | 第26-27页 |
| 2.2.1 病毒的接种与收获 | 第26页 |
| 2.2.2 生长曲线的绘制 | 第26-27页 |
| 2.3 乙脑病毒减毒株的选育 | 第27-30页 |
| 2.3.1 病毒的连续传代培养 | 第27页 |
| 2.3.2 病毒的空斑纯化 | 第27页 |
| 2.3.3 减毒株的筛选 | 第27-30页 |
| 2.3.3.1 F106代纯化后减毒株的筛选 | 第27-30页 |
| 2.3.3.2 F117代纯化后减毒株的筛选 | 第30页 |
| 2.4 乙脑减毒株YA1-0901安全性检测 | 第30-31页 |
| 2.4.1 神经毒力检测 | 第30-31页 |
| 2.4.2 神经侵袭力检测 | 第31页 |
| 2.5 乙脑减毒株YA1-0901毒力返强试验 | 第31-32页 |
| 2.5.1 神经毒力测定 | 第32页 |
| 2.5.2 神经侵袭力测定 | 第32页 |
| 2.6 乙脑减毒株YA1-0901毒力基因位点分析 | 第32-37页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.6.2 病毒RNA的提取 | 第33页 |
| 2.6.3 cDNA的合成 | 第33-34页 |
| 2.6.4 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.6.5 目的片段的回收 | 第35页 |
| 2.6.6 平末端加A | 第35页 |
| 2.6.7 加A产物纯化 | 第35页 |
| 2.6.8 目的片段的克隆 | 第35-37页 |
| 2.6.8.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.6.8.2 目的片段连接T载体 | 第36页 |
| 2.6.8.3 连接产物的转化 | 第36-37页 |
| 2.6.8.4 阳性菌落的筛选与PCR鉴定 | 第37页 |
| 2.6.8.5 阳性菌落的扩大培养 | 第37页 |
| 2.6.8.6 质粒的提取 | 第37页 |
| 2.6.8.7 序列分析 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-48页 |
| 3.1 病毒初始接种量和病毒收获时间的优化 | 第37-39页 |
| 3.2 减毒株的选育 | 第39-43页 |
| 3.2.1 F106代空斑纯化后毒力筛选结果 | 第39-43页 |
| 3.2.2 F117代空斑纯化后毒力筛选结果 | 第43页 |
| 3.3 乙脑减毒株YA1-0901安全性检测结果 | 第43-44页 |
| 3.3.1 神经毒力检测结果 | 第43-44页 |
| 3.3.2 神经侵袭力测定结果 | 第44页 |
| 3.4 乙脑减毒株YA1-0901毒力返强试验结果 | 第44-45页 |
| 3.4.1 神经毒力检测结果 | 第44-45页 |
| 3.4.2 神经侵袭力检测结果 | 第45页 |
| 3.5 减毒株YA1-0901毒力基因位点分析结果 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 第二章 乙脑病毒减毒株SCYA201201-0901免疫特性研究 | 第51-64页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| 1.1 生物材料 | 第51页 |
| 1.2 试验试剂 | 第51页 |
| 1.3 试验仪器 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| 2.1 腹腔免疫方式 | 第51-53页 |
| 2.1.1 小鼠交叉免疫攻毒保护试验 | 第52页 |
| 2.1.2 乙脑抗体水平检测 | 第52-53页 |
| 2.1.3 小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验 | 第53页 |
| 2.2 脑内免疫方式 | 第53-54页 |
| 2.2.1 交叉免疫攻毒保护试验 | 第53-54页 |
| 2.2.2 小鼠乙脑抗体水平的检测 | 第54页 |
| 2.2.3 小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-61页 |
| 3.1 腹腔免疫接种方式 | 第54-58页 |
| 3.1.1 小鼠交叉攻毒保护试验 | 第54-56页 |
| 3.1.2 小鼠抗体产生水平测定 | 第56-57页 |
| 3.1.3 小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验 | 第57-58页 |
| 3.2 脑内免疫接种方式 | 第58-61页 |
| 3.2.1 小鼠交叉免疫攻毒保护试验 | 第58-59页 |
| 3.2.2 小鼠抗体水平的测定 | 第59-60页 |
| 3.2.3 小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 5 小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64页 |
| 创新 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第72页 |
