| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 PCV2概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 病原特征 | 第11-12页 |
| 1.1.2 流行亚型 | 第12-13页 |
| 1.2 病毒样颗粒 | 第13-16页 |
| 1.2.1 病毒样颗粒的特点 | 第13-15页 |
| 1.2.2 制备病毒样颗粒的表达系统 | 第15-16页 |
| 1.3 基于VLP的PCV2疫苗研究现状 | 第16-19页 |
| 1.4 本课题研究目的和意义 | 第19-22页 |
| 1.4.1 目的及意义 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 PCV2 Cap蛋白酿酒酵母多/单拷贝表达载体的构建 | 第22-44页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 质粒、菌株及引物 | 第23-25页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要溶液和培养基的配置 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增与克隆 | 第26-27页 |
| 2.3.2 ORF2基因密码子优化 | 第27页 |
| 2.3.3 目的片段纯化回收 | 第27页 |
| 2.3.4 DH5α感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| 2.3.5 PCR回收产物与克隆载体构建重组载体 | 第28页 |
| 2.3.6 连接产物的转化与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.7 多拷贝重组表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.3.8 单拷贝重组质粒的构建 | 第32-36页 |
| 2.3.9 重组质粒的提取及验证 | 第36-37页 |
| 2.4 结果 | 第37-41页 |
| 2.4.1 ORF2基因克隆 | 第37页 |
| 2.4.2 进化树分型 | 第37-38页 |
| 2.4.3 基于酿酒酵母偏爱性进行密码子优化 | 第38-39页 |
| 2.4.4 DpnI酶消除原有模板 | 第39-40页 |
| 2.4.5 重组质粒PCR验证结果 | 第40-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 2.6 小结 | 第43-44页 |
| 第3章 PCV2 Cap蛋白在酿酒酵母中分泌表达及鉴定 | 第44-58页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.3.1 重组质粒线性化 | 第48页 |
| 3.3.2 酿酒酵母的DNA转化 | 第48-49页 |
| 3.3.3 酵母基因组提取及目的菌株的筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.4 体外分泌蛋白和胞内蛋白提取 | 第50页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE表达鉴定 | 第50页 |
| 3.3.6 Western blot鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.4.1 重组质粒酶切结果 | 第51页 |
| 3.4.2 酵母转化 | 第51-52页 |
| 3.4.3 重组酵母菌株的筛选 | 第52-54页 |
| 3.4.4 多拷贝载体的表达和鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.5 单拷贝载体的表达和鉴定 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-57页 |
| 3.6 小结 | 第57-58页 |
| 第4章 Cap蛋白VLPs的鉴定和反应动力学研究 | 第58-66页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-61页 |
| 4.3.1 蔗糖梯度离心 | 第58-59页 |
| 4.3.2 电镜下观察VLP的组装 | 第59页 |
| 4.3.3 反应动力学 | 第59-60页 |
| 4.3.4 总蛋白、Cap蛋白表达量测定 | 第60-61页 |
| 4.4 实验结果 | 第61-64页 |
| 4.4.1 蔗糖梯度离心样品western blot分析 | 第61页 |
| 4.4.2 反应动力学 | 第61-63页 |
| 4.4.3 Cap蛋白表达量 | 第63页 |
| 4.4.4 利用酿酒酵母表达的分泌型Cap蛋白制备VLPs的鉴定结果 | 第63-64页 |
| 4.5 讨论 | 第64页 |
| 4.6 小结 | 第64-66页 |
| 第5章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
