| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 分枝机理的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2 TB1基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 TCP家族的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.3.1 TCP家族的产生与发展 | 第17-19页 |
| 1.3.2 TCP家族在植物生长中的作用 | 第19-22页 |
| 1.3.3 TCP家族的转录调控机制 | 第22页 |
| 1.4 展望 | 第22-23页 |
| 2 材料与仪器 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 植株与菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 载体、工具酶及引物 | 第23-25页 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第26-29页 |
| 2.1.4.1 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.4.2 抗生素及化学贮存液 | 第27页 |
| 2.1.4.3 质粒及基因组提取试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4.4 常用缓冲液及试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 实验仪器 | 第29-31页 |
| 3 试验方法 | 第31-52页 |
| 3.1 酵母双杂交筛选与OsTB1相互作用的蛋白 | 第31-43页 |
| 3.1.1 BD诱饵融合载体的构建 | 第31-34页 |
| 3.1.1.1 目的基因的扩增与克隆 | 第31-33页 |
| 3.1.1.2 诱饵融合载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.2 诱饵转化酵母菌株并检测 | 第34-38页 |
| 3.1.2.1 诱饵融合载体转化到酵母菌 | 第34页 |
| 3.1.2.2 转化结果的检测 | 第34-36页 |
| 3.1.2.3 Bait自身激活活性的检测 | 第36页 |
| 3.1.2.4 Bait细胞毒性的检测 | 第36页 |
| 3.1.2.5 Bait蛋白表达的检测 | 第36-38页 |
| 3.1.3 诱饵菌株筛选cDNA文库 | 第38-39页 |
| 3.1.3.1 筛选cDNA文库 | 第38-39页 |
| 3.1.3.2 阳性酵母菌落的鉴定 | 第39页 |
| 3.1.3.3 重要阳性克隆转入大肠杆菌 | 第39页 |
| 3.1.4 验证酵母双杂交筛出的阳性克隆 | 第39-40页 |
| 3.1.4.1 阳性质粒转入酵母菌AH109 | 第39页 |
| 3.1.4.2 小规模酵母双杂交 | 第39页 |
| 3.1.4.3 QDO验证 | 第39-40页 |
| 3.1.5 Pull-down验证 | 第40-43页 |
| 3.1.5.1 MBP-OsTB1融合蛋白的原核表达 | 第40页 |
| 3.1.5.2 稀有密码子的修改后融合蛋白的原核表达 | 第40-42页 |
| 3.1.5.3 MBP-OsTB1XYN融合蛋白与amylose resin的结合 | 第42页 |
| 3.1.5.4 重要阳性克隆的体外转录翻译 | 第42页 |
| 3.1.5.5 pull-down验证 | 第42-43页 |
| 3.2 植物表达载体构建及功能研究 | 第43-52页 |
| 3.2.1 突变体的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.1.1 水稻基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 3.2.1.2 目的基因的扩增 | 第43页 |
| 3.2.1.3 目的基因SalⅠ酶切 | 第43-44页 |
| 3.2.2 糖皮质激素诱导表达载体的构建 | 第44-47页 |
| 3.2.2.1 目的基因的扩增与克隆 | 第44-45页 |
| 3.2.2.2 目的基因连入糖皮质激素诱导表达载体 | 第45-46页 |
| 3.2.2.3 转化农杆菌感受态细胞 | 第46-47页 |
| 3.2.3 带有标签的植物表达载体的构建 | 第47-51页 |
| 3.2.3.1 目的基因的扩增与克隆 | 第47-50页 |
| 3.2.3.2 目的基因连入Co-IP、ChIP植物表达载体 | 第50页 |
| 3.2.3.3 转化农杆菌感受态细胞 | 第50-51页 |
| 3.2.4 水稻的遗传转化及转基因阳性苗的筛选 | 第51-52页 |
| 4 结果与分析 | 第52-84页 |
| 4.1 酵母双杂交筛选OsTB1相互作用的蛋白 | 第52-68页 |
| 4.1.1 BD诱饵融合载体的构建 | 第52-55页 |
| 4.1.1.1 目的基因的扩增、克隆及测序 | 第52-53页 |
| 4.1.1.2 诱饵表达载体的构建结果 | 第53-55页 |
| 4.1.2 诱饵转化酵母菌株并检测 | 第55-58页 |
| 4.1.2.1 诱饵表达载体转化酵母菌Y187的检测结果 | 第55-56页 |
| 4.1.2.2 Bait自身激活活性的检测结果 | 第56-57页 |
| 4.1.2.3 Bait细胞毒性的检测结果 | 第57页 |
| 4.1.2.4 Bait蛋白的western检测结果 | 第57-58页 |
| 4.1.3 诱饵菌株筛选cDNA文库 | 第58-61页 |
| 4.1.3.1 cDNA文库的筛选 | 第58-59页 |
| 4.1.3.2 insert序列测定及分析 | 第59-61页 |
| 4.1.3.3 重要阳性克隆转入大肠杆菌 | 第61页 |
| 4.1.4 阳性克隆的验证结果 | 第61-62页 |
| 4.1.5 Pull-down验证 | 第62-68页 |
| 4.1.5.1 MBP-OsTB1融合蛋白的原核表达结果 | 第62-64页 |
| 4.1.5.2 稀有密码子的修改后融合蛋白的原核表达 | 第64-66页 |
| 4.1.5.3 MBP-OsTB1XYN端融合蛋白与amylose resin的结合 | 第66-67页 |
| 4.1.5.4 重要阳性克隆的体外转录翻译 | 第67-68页 |
| 4.1.5.5 pull-down验证 | 第68页 |
| 4.2 植物表达载体构建及功能研究 | 第68-81页 |
| 4.2.1 突变体的鉴定 | 第68-69页 |
| 4.2.1.1 水稻基因组DNA的提取 | 第68-69页 |
| 4.2.1.2 目的基因的扩增及酶切鉴定 | 第69页 |
| 4.2.2 糖皮质激素诱导表达载体的构建 | 第69-73页 |
| 4.2.2.1 目的基因的扩增、克隆与测序 | 第69-70页 |
| 4.2.2.2 糖皮质激素诱导表达载体的构建 | 第70-72页 |
| 4.2.2.3 农杆菌转化结果的鉴定 | 第72-73页 |
| 4.2.3 带有标签的植物表达载体的构建 | 第73-79页 |
| 4.2.3.1 目的基因的扩增、克隆与测序 | 第73-74页 |
| 4.2.3.2 Co-IP、ChIP植物表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 4.2.3.3 农杆菌转化结果的鉴定 | 第76-79页 |
| 4.2.4 水稻的遗传转化及转基因阳性苗的筛选 | 第79-81页 |
| 4.2.4.1 水稻的遗传转化 | 第79页 |
| 4.2.4.2 转基因阳性苗的筛选 | 第79-81页 |
| 4.2.4.3 转基因阳性苗的表型观察 | 第81页 |
| 4.3 讨论 | 第81-84页 |
| 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 附录 | 第93-95页 |
| 后记(含致谢) | 第95-96页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第96页 |
