| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第12-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-32页 |
| 1.1 乙型脑炎 | 第15-19页 |
| 1.1.1 乙型脑炎简介 | 第15页 |
| 1.1.2 乙型脑炎流行病学及其危害 | 第15-16页 |
| 1.1.3 乙型脑炎的临床症状和病理变化 | 第16页 |
| 1.1.4 乙型脑炎的诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.1.5 乙型脑炎的防治 | 第17-19页 |
| 1.2 乙型脑炎病毒 | 第19-22页 |
| 1.2.1 乙型脑炎病毒的基因组结构和功能 | 第19-20页 |
| 1.2.2 乙型脑炎病毒的入侵和复制 | 第20-21页 |
| 1.2.3 乙型脑炎病毒的致病机理 | 第21-22页 |
| 1.3 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.3.1 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白互作对病毒入侵的影响 | 第22-23页 |
| 1.3.2 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白互作对病毒复制的影响 | 第23-24页 |
| 1.3.3 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白互作对病毒包装、成熟及释放的影响 | 第24-25页 |
| 1.3.4 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白互作对病毒致病性的影响 | 第25-27页 |
| 1.3.4.1 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白互作对神经炎症反应的影响 | 第26页 |
| 1.3.4.2 乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白互作对天然免疫的影响 | 第26-27页 |
| 1.4 病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究方法 | 第27-30页 |
| 1.4.1 酵母双杂交系统 | 第27-28页 |
| 1.4.2 噬菌体表面展示技术 | 第28-29页 |
| 1.4.3 串联亲和纯化 | 第29-30页 |
| 1.5 黄病毒NS3蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展 | 第30-32页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 第3章 材料与方法 | 第33-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-39页 |
| 3.1.1 实验动物、细胞、毒株与菌种 | 第33页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第33-35页 |
| 3.1.3 主要药品及试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.4 主要培养基及其配制 | 第36-37页 |
| 3.1.5 主要缓冲液及其配制 | 第37-38页 |
| 3.1.6 主要的分子生物学分析软件 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-51页 |
| 3.2.1 JEV NS3蛋白单克隆抗体的制备 | 第39-42页 |
| 3.2.1.1 免疫原与检测抗原的制备 | 第39页 |
| 3.2.1.2 动物免疫 | 第39页 |
| 3.2.1.3 间接ELISA检测方法的建立 | 第39页 |
| 3.2.1.4 间接ELISA法检测小鼠的免疫效果 | 第39页 |
| 3.2.1.5 SP2/0 骨髓瘤细胞的准备 | 第39-40页 |
| 3.2.1.6 免疫小鼠脾细胞的准备 | 第40页 |
| 3.2.1.7 细胞融合 | 第40页 |
| 3.2.1.8 阳性杂交瘤细胞的筛选及亚克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.1.9 单克隆抗体的生产和纯化 | 第41页 |
| 3.2.1.10 单克隆抗体的生物学特性鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 JEV NS3蛋白与宿主蛋白相互作用的研究 | 第42-50页 |
| 3.2.2.1 质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2.2 细胞培养与处理 | 第43-44页 |
| 3.2.2.3 串联亲和纯化（TAP） | 第44-45页 |
| 3.2.2.4 硝酸银染色 | 第45页 |
| 3.2.2.5 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，co-IP） | 第45-46页 |
| 3.2.2.6 Western blot | 第46-47页 |
| 3.2.2.7 体外转录 | 第47页 |
| 3.2.2.8 间接免疫荧光（IFA） | 第47页 |
| 3.2.2.9 荧光定量PCR检测基因mRNA和miRNA水平 | 第47-50页 |
| 3.2.2.10 双荧光素酶报告实验 | 第50页 |
| 3.2.2.11 病毒滴度测定 | 第50页 |
| 3.2.3 统计学分析 | 第50-51页 |
| 第4章 结果与分析 | 第51-76页 |
| 4.1 JEV NS3蛋白单克隆抗体的制备 | 第51-54页 |
| 4.1.1 NS3蛋白的纯化鉴定 | 第51页 |
| 4.1.2 免疫小鼠血清效价的测定 | 第51页 |
| 4.1.3 单克隆抗体效价测定及亚型鉴定 | 第51-52页 |
| 4.1.4 单克隆抗体的Western blot检测 | 第52-53页 |
| 4.1.5 单克隆抗体的IFA检测 | 第53-54页 |
| 4.2 与JEV NS3蛋白相互作用宿主蛋白的筛选与鉴定 | 第54-56页 |
| 4.2.1 利用串联亲和纯化与质谱分析结合法筛选与JEV NS3互作的宿主蛋白 | 第54-55页 |
| 4.2.1.1 JEV NS3蛋白的串联亲和纯化 | 第54-55页 |
| 4.2.1.2 串联纯化后蛋白的质谱分析 | 第55页 |
| 4.2.2 与JEV NS3互作的宿主蛋白的验证 | 第55-56页 |
| 4.3 JEV NS3与宿主蛋白EEF1A1相互作用的功能探究 | 第56-64页 |
| 4.3.1 JEV NS3能够与宿主细胞内源的EEF1A1蛋白相互作用 | 第56-57页 |
| 4.3.2 JEV NS3与宿主蛋白EEF1A1的相互作用不依赖RNA参与 | 第57-58页 |
| 4.3.3 EEF1A1与JEV复制复合体组成成分相互作用 | 第58-60页 |
| 4.3.4 EEF1A1正调控JEV的复制 | 第60-61页 |
| 4.3.5 EEF1A1可帮助稳定JEV复制复合体的组分 | 第61-64页 |
| 4.4 JEV调控EEF1A1表达的分子机制 | 第64-73页 |
| 4.4.1 JEV感染上调EEF1A1的表达 | 第64-65页 |
| 4.4.2 JEV感染下调miR-33a-5p的表达 | 第65-67页 |
| 4.4.3 miR-33a-5p靶向EEF1A1 | 第67-70页 |
| 4.4.4 JEV感染下调miR-33a-5p前体的表达 | 第70页 |
| 4.4.5 JEV感染抑制转录因子SP1、NF-Y的转录活性 | 第70-73页 |
| 4.5 miR-33a-5p靶向EEF1A1调控JEV复制的机制研究 | 第73-76页 |
| 4.5.1 miR-33a-5p抑制JEV的复制 | 第73-74页 |
| 4.5.2 miR-33a-5p通过靶向EEF1A1调控JEV的复制 | 第74-76页 |
| 第5章 讨论 | 第76-82页 |
| 5.1 EEF1A1与JEV复制复合体主要组分互作调控JEV的复制 | 第76-77页 |
| 5.2 EEF1A1调控JEV复制的机理 | 第77-78页 |
| 5.3 JEV调控EEF1A1表达的分子机制 | 第78-79页 |
| 5.4 JEV调控miR-33a-5p表达的分子机制 | 第79-81页 |
| 5.5 miR-33a-5p通过靶向EEF1A1调控JEV复制 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
