| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-30页 |
| 1.1 研究背景 | 第16页 |
| 1.2 研究内容和目的 | 第16-17页 |
| 1.3 多功能基因与多功能干细胞的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.3.1 多功能干细胞的来源和特点 | 第17-18页 |
| 1.3.2 POU5F1在多功能干细胞中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.3 SOX2在多功能干细胞中的作用 | 第19-20页 |
| 1.3.4 KLF4在多功能干细胞中的作用 | 第20页 |
| 1.3.5 MYC在多功能干细胞中的作用 | 第20页 |
| 1.4 多功能基因间的互作与细胞重编程的研究现状 | 第20-23页 |
| 1.4.1 多功能基因间的互作 | 第20-21页 |
| 1.4.2 POU5F1、SOX2和KLF4在细胞重编程中的作用 | 第21-22页 |
| 1.4.3 MYC在细胞重编程中的作用 | 第22-23页 |
| 1.5 多功能基因与生殖系发育 | 第23-24页 |
| 1.5.1 POU5F1对生殖系发育的作用 | 第23-24页 |
| 1.5.2 SOX2对生殖系发育的作用 | 第24页 |
| 1.5.3 KLF4对生殖系发育的作用 | 第24页 |
| 1.5.4 MYC对生殖系发育的作用 | 第24页 |
| 1.6 绵羊诱导多功能干细胞的研究现状 | 第24-26页 |
| 1.7 POU5F1、SOX2、KLF4和MYC蛋白质结构特点的研究现状 | 第26-28页 |
| 1.8 睾丸Leydig细胞的生理功能和形态特点 | 第28-30页 |
| 第二章 绵羊POU5F1、SOX2、KLF4和MYC基因的分子克隆、序列特征及其在睾丸组织中的表达分析 | 第30-59页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 材料和方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 动物材料 | 第30页 |
| 2.2.2 伊红-苏木素染色 | 第30页 |
| 2.2.3 绵羊胎儿成纤维细胞（sheep fetal fibroblast cells, SFFCs）的培养 | 第30-31页 |
| 2.2.4 总RNA提取和c DNA合成 | 第31页 |
| 2.2.5 基因组的提取 | 第31页 |
| 2.2.6 PCR | 第31-32页 |
| 2.2.7 引物设计 | 第32页 |
| 2.2.8 分子序列的生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.2.9 半定量RT-PCR（Semi-quantitative RT-PCR） | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-51页 |
| 2.3.1 绵羊睾丸组织的结构特点 | 第32-34页 |
| 2.3.2 绵羊胎儿成纤维细胞（SFFCs）的体外生长形态 | 第34页 |
| 2.3.3 POU5F1基因在新生和性成熟湖羊睾丸组织中表达及其mRNA序列分析 | 第34-36页 |
| 2.3.4 SOX2基因在新生和性成熟湖羊睾丸组织中表达及其mRNA序列分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5 MYC基因在新生湖羊睾丸组织中表达及其mRNA序列分析 | 第37页 |
| 2.3.6 蒙古绵羊KLF4基因组的分子克隆及序列分析 | 第37-38页 |
| 2.3.7 绵羊POU5F1、SOX2、KLF4和MYC蛋白的氨基酸序列分析 | 第38-43页 |
| 2.3.8 绵羊POU5F1、SOX2、KLF4和MYC蛋白的次级结构和三级结构分析 | 第43-46页 |
| 2.3.9 绵羊POU5F1、SOX2、KLF4和MYC蛋白的同源分析和系统发育树构建 | 第46-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-58页 |
| 2.4.1 绵羊和其它哺乳动物的POU5F1、SOX2、KLF4和MYC氨基酸序列的保守性 | 第51-55页 |
| 2.4.2 绵羊POU5F1氨基酸序列的特异性 | 第55-56页 |
| 2.4.3 POU5F1、SOX2和MYC基因在绵羊睾丸中的表达方式 | 第56-57页 |
| 2.4.4 绵羊和其它哺乳动物的KLF4基因外显子的结构 | 第57-58页 |
| 2.5 小结 | 第58-59页 |
| 第三章 pMXs-oPOU5F1、pMXs-oSOX2、pMXs-oKLF4和pMXs-oMYC载体的构建 | 第59-74页 |
| 3.1 前言 | 第59页 |
| 3.2 材料和方法 | 第59-62页 |
| 3.2.1 动物材料 | 第59页 |
| 3.2.2 限制性内切酶的酶切反应与DNA粘性末端的连接 | 第59-60页 |
| 3.2.3 载体的转化与扩增 | 第60页 |
| 3.2.4 细胞培养 | 第60页 |
| 3.2.5 细胞的传代、冻存与解冻 | 第60页 |
| 3.2.6 AMPHO细胞的转染 | 第60-61页 |
| 3.2.7 绵羊的Leydig细胞的逆转录病毒感染 | 第61页 |
| 3.2.8 RT-PCR | 第61-62页 |
| 3.3 结果 | 第62-73页 |
| 3.3.1 待插入载体内的含有绵羊POU5F1、SOX2、KLF4和MYC的mRNA序列的DNA产物的克隆 | 第62-67页 |
| 3.3.2 pMXs-oPOU5F1、pMXs-oSOX2、pMXs-oKLF4和pMXs-oMYC载体的验证 | 第67-68页 |
| 3.3.3 pMXs-oPOU5F1、pMXs-oSOX2、pMXs-oKLF4和pMXs-oMYC质粒的抽提 | 第68-69页 |
| 3.3.4 pMXs-oPOU5F1、pMXs-oSOX2、pMXs-o KLF4和pMXs-oMYC质粒在AMPHO细胞中转染效率的预测 | 第69-71页 |
| 3.3.5 新生绵羊的睾丸Leydig细胞的体外生长形态 | 第71页 |
| 3.3.6 pMXs-oPOU5F1、pMXs-oSOX2、pMXs-oKLF4和pMXs-oMYC质粒在新生绵羊Leydig细胞中感染效率的预测 | 第71-73页 |
| 3.3.7 pMXs-oPOU5F1、pMXs-oSOX2、pMXs-oKLF4和pMXs-oMYC基因可在新生绵羊Leydig细胞中逆转录表达 | 第73页 |
| 3.4 讨论 | 第73页 |
| 3.5 小结 | 第73-74页 |
| 第四章 成年小鼠Leydig细胞在体外培养条件下的形态特征 | 第74-82页 |
| 4.1 前言 | 第74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-76页 |
| 4.2.1 动物和试剂 | 第74页 |
| 4.2.2 伊红-苏木素染色 | 第74页 |
| 4.2.3 睾丸组织的解剖 | 第74页 |
| 4.2.4 Leydig细胞的隔离与培养 | 第74-75页 |
| 4.2.5 HSD3B染色 | 第75页 |
| 4.2.6 RT-PCR | 第75-76页 |
| 4.3 结果 | 第76-80页 |
| 4.3.1 体内Leydig细胞的形态特征 | 第76-77页 |
| 4.3.2 体外培养条件下Leydig细胞呈现清晰的细胞核与细胞质 | 第77-79页 |
| 4.3.3 体外培养条件下Leydig细胞的形态 | 第79-80页 |
| 4.3.4 Leydig细胞的鉴定 | 第80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-81页 |
| 4.5 小结 | 第81-82页 |
| 第五章 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 附录 | 第95-103页 |
| 附录-1 pMXs-oPOU5F1载体序列 | 第95-97页 |
| 附录-2 pMXs-oSOX2载体序列 | 第97-99页 |
| 附录-3 pMXs-oKLF4载体序列 | 第99-101页 |
| 附录-4 pMXs-oMYC载体序列 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简历 | 第104页 |
