致谢 | 第6-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
缩略词 | 第12-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-49页 |
1.1 耐辐射奇球菌的研究进展 | 第16-29页 |
1.1.1 耐辐射奇球菌的分类 | 第16-17页 |
1.1.2 耐辐射奇球菌的形态结构与生长特性 | 第17-19页 |
1.1.3 耐辐射奇球菌的基因组结构 | 第19-21页 |
1.1.4 耐辐射奇球菌的抗性机制 | 第21-29页 |
1.2 cAMP受体蛋白的研究进展 | 第29-40页 |
1.2.1 cAMP受体蛋白的发现 | 第30页 |
1.2.2 cAMP受体蛋白转录因子的组分 | 第30-34页 |
1.2.3 cAMP受体蛋白的作用机制 | 第34-38页 |
1.2.4 cAMP受体蛋白调控的多样性与广泛性 | 第38-39页 |
1.2.5 CRP的研究意义 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-49页 |
第二章 耐辐射奇球菌CRP基因突变株的构建及突变株遗传学分析 | 第49-75页 |
2.1 引言 | 第49-50页 |
2.2 实验材料与仪器 | 第50-52页 |
2.2.1 菌株 | 第50-51页 |
2.2.2 仪器与设备 | 第51-52页 |
2.3 实验方法 | 第52-59页 |
2.3.1 CRP同源蛋白的生物信息学分析 | 第52页 |
2.3.2 耐辐射奇球菌总RNA的提取及RT-PCR | 第52-53页 |
2.3.3 氧化压力胁迫下crp基因的转录表达变化 | 第53页 |
2.3.4 基因缺失突变菌株及其补偿株的构建 | 第53-55页 |
2.3.5 耐辐射奇球菌生长曲线的测定实验 | 第55页 |
2.3.6 突变株H_2O_2表型实验 | 第55-56页 |
2.3.7 突变株UV表型实验 | 第56-57页 |
2.3.8 突变株Mitomycin C表型实验 | 第57页 |
2.3.9 突变株电离辐射表型实验 | 第57页 |
2.3.10 过氧化氢酶和总抗氧化活性检测实验 | 第57-59页 |
2.4 实验结果与分析 | 第59-70页 |
2.4.0 同源序列比对分析 | 第59页 |
2.4.1 氧化压力下crp基因的转录水平 | 第59-60页 |
2.4.2 CRP突变株鉴定 | 第60-61页 |
2.4.3 CRP突变株的生长曲线 | 第61-63页 |
2.4.4 CRP突变株H_2O_2抗性 | 第63-64页 |
2.4.5 CRP突变株HClO抗性 | 第64-65页 |
2.4.6 CRP突变株UV抗性 | 第65-66页 |
2.4.7 CRP突变株Mitomycin C抗性 | 第66-67页 |
2.4.8 CRP突变株电离辐射抗性 | 第67-68页 |
2.4.9 突变影响细胞过氧化氢酶活性与总抗氧化活性 | 第68-70页 |
2.5 讨论 | 第70-72页 |
参考文献 | 第72-75页 |
第三章 耐辐射奇球菌CRP家族蛋白DR0997调控概况研究 | 第75-105页 |
3.1 引言 | 第75页 |
3.2 实验菌种,试剂及仪器 | 第75-77页 |
3.3 实验方法 | 第77-81页 |
3.3.1 DR0997同源性及保守位点分析 | 第77页 |
3.3.2 Dr0997基因及dr0615基因的克隆 | 第77页 |
3.3.3 DR0615与DR0997表达菌株的构建 | 第77-78页 |
3.3.4 DR0997蛋白的表达与纯化 | 第78-79页 |
3.3.5 DR0615蛋白的诱导与纯化 | 第79页 |
3.3.6 凝胶迁移率实验 | 第79-80页 |
3.3.7 耐辐射奇球菌总RNA的提取及RT-PCR | 第80-81页 |
3.4 结果与分析 | 第81-101页 |
3.4.1 DR0997序列矫正 | 第81-83页 |
3.4.2 DR0997与DR0615的表达与纯化 | 第83-84页 |
3.4.3 DR0997与启动子DNA结合 | 第84-87页 |
3.4.4 DR0997结合CRP保守结合位点调控基因表达 | 第87-94页 |
3.4.5 DR0997调控途径分类 | 第94-101页 |
3.5 讨论 | 第101-103页 |
参考文献 | 第103-105页 |
第四章 耐精射奇球菌CRP调控Ter抗性基因的表达研究 | 第105-122页 |
4.1 引言 | 第105-106页 |
4.2 实验材料与仪器 | 第106-107页 |
4.2.1 菌株与质粒 | 第106页 |
4.2.2 实验试剂 | 第106-107页 |
4.2.3 实验仪器 | 第107页 |
4.3 实验方法 | 第107-111页 |
4.3.1 碲抗性基因的生物信息学分析 | 第107页 |
4.3.2 凝胶迁移率试验 | 第107-108页 |
4.3.3 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第108页 |
4.3.4 Ter相关性基因敲除 | 第108-109页 |
4.3.5 Ter敲除菌株H_2O_2抗性试验 | 第109页 |
4.3.6 Ter敲除菌株的过氧化氢酶活性与总抗氧化活性检测 | 第109页 |
4.3.7 dr0997突变株的亚碲酸钾抗性试验 | 第109-110页 |
4.3.8 耐辐射奇球菌总RNA的提取及qRT-PCR | 第110-111页 |
4.4 结果与分析 | 第111-118页 |
4.4.1 Ter resistance protein的生物信息学分析 | 第111-112页 |
4.4.2 凝胶迁移率检测DR0997结合碲抗性基因的启动子序列 | 第112-113页 |
4.4.3 β-半乳糖苷酶检测DR0997调控碲抗性基因的启动子序列 | 第113-114页 |
4.4.4 碲抗性相关基因的敲除与鉴定 | 第114-115页 |
4.4.5 Ter敲除菌株H_2O_2抗性 | 第115页 |
4.4.6 Ter敲除菌株的过氧化氢酶活性与总抗氧化活性分析 | 第115-116页 |
4.4.7 dr0997突变株的碲盐抗性 | 第116-117页 |
4.4.8 Ter相关性基因RT-PCR分析 | 第117-118页 |
4.5 讨论 | 第118-120页 |
参考文献 | 第120-122页 |
总结与展望 | 第122-125页 |
附录1 实验中用到的引物列表 | 第125-131页 |