| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 腈转化酶 | 第12-13页 |
| 1.2 腈水合酶 | 第13-17页 |
| 1.2.1 NHase的来源 | 第13-14页 |
| 1.2.2 NHase的结构和催化机理 | 第14-15页 |
| 1.2.3 NHase的催化特性 | 第15-17页 |
| 1.2.3.1 区域选择性 | 第15-16页 |
| 1.2.3.2 立体选择性 | 第16页 |
| 1.2.3.3 光激活性 | 第16-17页 |
| 1.3 左乙拉西坦 | 第17-18页 |
| 1.4 L-α-氨基丁酰胺的化学合成方法 | 第18-20页 |
| 1.4.1 合成路线一 | 第18-19页 |
| 1.4.2 合成路线二 | 第19页 |
| 1.4.3 合成路线三 | 第19-20页 |
| 1.5 (L)-α-氨基丁酰胺的生物合成方法 | 第20-21页 |
| 1.6 本论文研究内容 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 第二章 α-氨基丁酰胺检测方法的建立及菌种筛选 | 第27-40页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 仪器与试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 培养基 | 第28页 |
| 2.2.2.2 摇瓶发酵法 | 第28页 |
| 2.2.2.3 薄层层析条件 | 第28页 |
| 2.2.2.4 柱前衍生化条件及高效液相色谱检测条件 | 第28页 |
| 2.2.2.5 静息细胞生物转化 | 第28-29页 |
| 2.2.2.6 NHase活力测定 | 第29页 |
| 2.2.3 检测方法的优化 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 薄层层析展开剂的优化 | 第29页 |
| 2.2.3.2 DNFB添加量的优化 | 第29页 |
| 2.2.3.3 衍生化温度的优化 | 第29页 |
| 2.2.3.4 α-氨基丁酰胺高效液相色谱谱图的绘制 | 第29-30页 |
| 2.2.3.5 标准曲线的绘制 | 第30页 |
| 2.2.3.6 实验菌株的筛选 | 第30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-38页 |
| 2.3.1 不同展开剂配比对Rf值的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.2 液相检测方法的建立 | 第31-37页 |
| 2.3.2.1 α-氨基丁酰胺和DNFB添加量对衍生化的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.2.2 衍生化温度和时间对衍生化的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.2.3 高效液相色谱检测衍生产物 | 第34-36页 |
| 2.3.2.4 标准曲线的绘制及回收率确定 | 第36-37页 |
| 2.3.3 转化 α-氨基丁腈的产NHase菌株筛选 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| 第三章 N. globerula产腈水合酶培养基条件优化 | 第40-53页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料与方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 仪器与试剂 | 第40页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3.2.2.1 菌种 | 第40页 |
| 3.2.2.2 培养基 | 第40-41页 |
| 3.2.2.3 摇瓶发酵法 | 第41页 |
| 3.2.2.4 柱前衍生化条件及高效液相色谱检测条件 | 第41页 |
| 3.2.2.5 静息细胞生物转化 | 第41页 |
| 3.2.3 培养条件优化 | 第41-42页 |
| 3.2.3.1 碳源对产酶的影响 | 第41页 |
| 3.2.3.2 氮源对产酶的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.3.3 诱导剂对产酶的影响 | 第42页 |
| 3.2.3.4 初始培养基pH对产酶的影响 | 第42页 |
| 3.2.3.5 摇瓶装液量对产酶的影响 | 第42页 |
| 3.2.3.6 接种量对产酶的影响 | 第42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-51页 |
| 3.3.1 碳源对产酶的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.2 氮源对产酶的影响 | 第44-46页 |
| 3.3.3 诱导剂对产酶的影响 | 第46-48页 |
| 3.3.4 培养基初始p H对产酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.5 摇瓶装液量对产酶的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.6 接种量对产酶的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第四章 N. globerula静息细胞生物转化条件的优化 | 第53-65页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 仪器与试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.2.1 菌种 | 第54页 |
| 4.2.2.2 培养基 | 第54页 |
| 4.2.2.3 摇瓶发酵法 | 第54页 |
| 4.2.2.4 柱前衍生化条件及高效液相色谱检测条件 | 第54页 |
| 4.2.2.5 初始静息细胞生物转化 | 第54-55页 |
| 4.2.3 生物转化体系优化 | 第55-56页 |
| 4.2.3.1 反应温度对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第55页 |
| 4.2.3.2 反应pH对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第55页 |
| 4.2.3.3 底物浓度对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第55页 |
| 4.2.3.4 菌体添加量对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第55页 |
| 4.2.3.5 反应时间对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第55页 |
| 4.2.3.6 底物流加和菌体流加对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第55-56页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第56-63页 |
| 4.3.1 反应温度对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.2 反应pH对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第57页 |
| 4.3.3 底物浓度对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.4 菌体添加量对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.5 反应时间对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.6 底物流加和菌体流加对 α-氨基丁酰胺生成的影响 | 第60-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第五章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 总结 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士间发表的论文 | 第68页 |
