| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词及中文对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶 | 第12-13页 |
| 1.1.1 BGL的定义与分类 | 第12页 |
| 1.1.2 BGL的结构与催化机理 | 第12-13页 |
| 1.2 BGL基因的定向进化 | 第13-17页 |
| 1.2.1 酶的基因改造 | 第13-15页 |
| 1.2.2 酶的异源表达系统 | 第15-17页 |
| 1.3 BGL工程菌在纤维乙醇的应用 | 第17-19页 |
| 1.3.1 BGL应用于细胞表面展示 | 第17-18页 |
| 1.3.2 BGL应用于酶的循环回收 | 第18页 |
| 1.3.3 BGL应用于SSF | 第18页 |
| 1.3.4 BGL应用于整合生物加工工艺 | 第18-19页 |
| 1.4 课题的提出及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 1.4.1 课题的提出 | 第19-20页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 β-葡萄糖苷酶的筛选及性质研究 | 第21-42页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 菌种及试剂 | 第21页 |
| 2.2.2 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.3 所用主要设备及仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.4 分析方法 | 第23-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.3.1 菌株分离 | 第25页 |
| 2.3.2 菌株鉴定 | 第25页 |
| 2.3.3 BGL粗酶发酵 | 第25-26页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE总蛋白电泳 | 第26-28页 |
| 2.3.5 酶的反应pH及pH稳定性 | 第28-29页 |
| 2.3.6 酶的反应温度及热稳定性 | 第29页 |
| 2.3.7 酶的离子及化学特性 | 第29-30页 |
| 2.3.8 糖类对酶活的影响 | 第30页 |
| 2.3.9 有机溶剂对酶活的影响 | 第30页 |
| 2.4 实验结果 | 第30-41页 |
| 2.4.1 高产BGL菌株筛选 | 第30-31页 |
| 2.4.2 不同诱导原料分析 | 第31-33页 |
| 2.4.3 不同生物质原料诱导产酶效果 | 第33-34页 |
| 2.4.4 BGL酶的最适pH及pH稳定性 | 第34-35页 |
| 2.4.5 BGL酶的最适温度及热稳定性 | 第35-36页 |
| 2.4.6 不同离子及化学物质对BGL酶活的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.7 不同糖类对酶活的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.8 有机溶剂对酶活的影响 | 第38-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 嗜温耐醇b-葡萄糖苷酶基因克隆及毕赤酵母表达 | 第42-69页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1 菌种、质粒及试剂 | 第42页 |
| 3.2.2 所用主要设备及仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.3 所用培养基及配制 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-54页 |
| 3.3.1 引物设计及cDNA克隆 | 第44-49页 |
| 3.3.3 毕赤酵母高效表达 | 第49-51页 |
| 3.3.4 表达BGL的纯化 | 第51-52页 |
| 3.3.5 epB-BGL的分子模拟 | 第52页 |
| 3.3.6 epB-BGL关键位点突变 | 第52-54页 |
| 3.3.7 重组突变酶的表达 | 第54页 |
| 3.4 实验结果 | 第54-68页 |
| 3.4.1 Hypocrea sp.W63 的cDNA获取及表达质粒构建 | 第54-57页 |
| 3.4.2 epB-BGL在毕赤酵母的高效表达、纯化与鉴定 | 第57-61页 |
| 3.4.3 重组酶的性质初步测定 | 第61-64页 |
| 3.4.5 epB-BGL的蛋白结构模拟 | 第64-65页 |
| 3.4.6 关键结构位点突变 | 第65-68页 |
| 3.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 β-葡萄糖苷酶应用于纤维素糖化生产乙醇 | 第69-78页 |
| 4.1 前言 | 第69页 |
| 4.2 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.2.1 菌种、材料及试剂 | 第69-70页 |
| 4.2.2 所用培养基及配制 | 第70页 |
| 4.3 实验方法 | 第70-72页 |
| 4.3.1 纤维素原料预处理 | 第70页 |
| 4.3.2 分批补料纤维素酶解 | 第70页 |
| 4.3.3 SSF | 第70-71页 |
| 4.3.4 高温补料SSF | 第71页 |
| 4.3.5 高温SSF | 第71页 |
| 4.3.6 产物检测方法 | 第71-72页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第72-76页 |
| 4.4.1 BGL协同酶解纤维素效果 | 第72-73页 |
| 4.4.2 BGL应用于SSF效果 | 第73-74页 |
| 4.4.3 BGL应用于高温补料SSF效果 | 第74-75页 |
| 4.4.4 epB-BGL应用于高温SSF | 第75-76页 |
| 4.5 本章小结 | 第76-78页 |
| 第五章 总结与展望 | 第78-80页 |
| 5.1 主要结论 | 第78页 |
| 5.2 论文的主要创新点 | 第78-79页 |
| 5.3 研究展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92页 |
