| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 嗜水气单胞菌的研究现状 | 第10-12页 |
| 1.1 嗜水气单胞菌概述 | 第10页 |
| 1.2 嗜水气单胞菌病的危害 | 第10-11页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌的毒力因子 | 第11页 |
| 1.4 嗜水气单胞菌的耐药现状 | 第11-12页 |
| 2 细菌耐药性的产生和散播机制 | 第12-15页 |
| 2.1 固有耐药 | 第12页 |
| 2.2 获得性耐药 | 第12-15页 |
| 2.2.1 基因突变 | 第12页 |
| 2.2.2 基因的水平转移 | 第12-15页 |
| 3 耐药性消除的研究进展 | 第15-18页 |
| 3.1 化学试剂 | 第15-16页 |
| 3.2 抗生素 | 第16页 |
| 3.3 中草药 | 第16-18页 |
| 4 核酸探针技术 | 第18-20页 |
| 4.1 探针的分类 | 第18页 |
| 4.2 核酸探针的标记 | 第18-19页 |
| 4.3 核酸探针的分子杂交类型 | 第19页 |
| 4.4 核酸探针的应用及前景 | 第19-20页 |
| 第二章 嗜水气单胞菌气溶素和Ⅰ类整合子多重PCR检测方法的建立及应用 | 第20-36页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 菌株及病料来源 | 第20页 |
| 1.2 培养基 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-24页 |
| 2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2 模板的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.1 嗜水气单胞菌生长曲线的测定 | 第21页 |
| 2.2.2 细菌计数 | 第21-22页 |
| 2.2.3 模板的制备 | 第22页 |
| 2.3 PCR扩增 | 第22页 |
| 2.4 单重PCR的条件优化 | 第22页 |
| 2.4.1 最佳退火温度的优化 | 第22页 |
| 2.4.2 最佳引物浓度的优化 | 第22页 |
| 2.4.3 敏感性检测 | 第22页 |
| 2.4.4 特异性检测 | 第22页 |
| 2.5 双重PCR检测方法的建立及条件优化 | 第22-23页 |
| 2.5.1 最佳退火温度的优化 | 第22-23页 |
| 2.5.2 最佳引物浓度的优化 | 第23页 |
| 2.6 三重PCR检测方法的建立及条件优化 | 第23页 |
| 2.6.1 最佳退火温度的优化 | 第23页 |
| 2.6.2 最佳引物浓度的优化 | 第23页 |
| 2.7 病料检测 | 第23-24页 |
| 2.7.1 疑似菌分离 | 第23页 |
| 2.7.2 三重PCR检测 | 第23页 |
| 2.7.3 分离菌的致病性试验 | 第23页 |
| 2.7.4 药敏试验 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-34页 |
| 3.1 模板的制备 | 第24页 |
| 3.1.1 嗜水气单胞菌生长曲线的测定 | 第24页 |
| 3.1.2 细菌计数 | 第24页 |
| 3.2 单重PCR扩增结果 | 第24-29页 |
| 3.2.1 最佳退火温度的优化 | 第24-26页 |
| 3.2.2 最佳引物浓度的优化 | 第26-27页 |
| 3.2.3 单重PCR特异性检测 | 第27-28页 |
| 3.2.4 单重PCR敏感性检测 | 第28-29页 |
| 3.3 双重PCR检测方法的建立及条件优化 | 第29-31页 |
| 3.3.1 双重PCR最佳退火温度的优化 | 第29-30页 |
| 3.3.2 双重PCR最佳引物浓度的优化 | 第30-31页 |
| 3.4 三重PCR检测方法的建立及条件优化 | 第31-32页 |
| 3.4.1 三重PCR最佳退火温度的优化 | 第31页 |
| 3.4.2 三重PCR最佳引物浓度的优化 | 第31-32页 |
| 3.5 病料检测 | 第32-34页 |
| 3.5.1 病料剖检 | 第32页 |
| 3.5.2 细菌的分离结果 | 第32页 |
| 3.5.3 三重PCR检测结果 | 第32-33页 |
| 3.5.4 PCR产物测序 | 第33页 |
| 3.5.5 分离菌的致病性试验 | 第33页 |
| 3.5.6 药敏试验 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 Ⅰ类整合子的定位 | 第36-42页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| 1.1 试剂 | 第36页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| 2.1 待测样品的提取 | 第37-38页 |
| 2.1.1 质粒提取 | 第37页 |
| 2.1.2 基因组提取 | 第37-38页 |
| 2.2 Ⅰ类整合子的定位 | 第38-39页 |
| 2.2.1 PCR法 | 第38页 |
| 2.2.2 斑点杂交法 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-41页 |
| 3.1 待测样品的提取 | 第39-40页 |
| 3.1.1 质粒提取 | 第39页 |
| 3.1.2 基因组提取 | 第39-40页 |
| 3.2 Ⅰ类整合子的定位 | 第40-41页 |
| 3.2.1 PCR法 | 第40页 |
| 3.2.2 斑点杂交法 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 耐药基因的定位 | 第42-50页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 1.1 菌株 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-44页 |
| 2.1 质粒转化 | 第42-43页 |
| 2.1.1 质粒提取 | 第42页 |
| 2.1.2 转化 | 第42-43页 |
| 2.1.3 转化子的鉴定 | 第43页 |
| 2.2 质粒消除 | 第43-44页 |
| 2.2.1 消除液的制备 | 第43页 |
| 2.2.2 试验组设置 | 第43页 |
| 2.2.3 最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第43页 |
| 2.2.4 质粒消除 | 第43页 |
| 2.2.5 消除子的鉴定 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-49页 |
| 3.1 质粒转化 | 第44-45页 |
| 3.1.1 质粒提取 | 第44页 |
| 3.1.2 质粒转化 | 第44-45页 |
| 3.1.3 药敏试验 | 第45页 |
| 3.2 质粒消除 | 第45-49页 |
| 3.2.1 MIC测定结果 | 第45页 |
| 3.2.2 质粒消除 | 第45-46页 |
| 3.2.3 消除子的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.4 药敏试验 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |