| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第16-40页 |
| 1.1 课题来源或研究背景 | 第16页 |
| 1.2 研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.3 骨钙素概述 | 第17-23页 |
| 1.3.1 骨钙素基因及蛋白 | 第17-19页 |
| 1.3.2 骨钙素基因的表达调控 | 第19-21页 |
| 1.3.3 骨钙素在骨外器官中的表达 | 第21-22页 |
| 1.3.4 骨钙素检测 | 第22-23页 |
| 1.4 骨钙素翻译后修饰 | 第23-26页 |
| 1.4.1 维生素K参与谷氨酸羧化过程 | 第23-24页 |
| 1.4.2 骨钙素的羧化修饰 | 第24-25页 |
| 1.4.3 骨钙素羧化调节 | 第25-26页 |
| 1.5 骨钙素的功能 | 第26-31页 |
| 1.5.1 骨钙素在骨骼中功能 | 第26-27页 |
| 1.5.2 骨钙素对糖脂代谢的调节作用 | 第27-29页 |
| 1.5.3 骨钙素对雄性性腺的调控作用 | 第29-31页 |
| 1.5.4 骨钙素对脑功能的调控作用 | 第31页 |
| 1.6 睾丸组织与雄性性腺分化基因SOX-9 功能简介 | 第31-33页 |
| 1.6.1 睾丸组织简介 | 第31-32页 |
| 1.6.2 SOX-9 基因功能简介 | 第32-33页 |
| 1.7 基因表达研究技术 | 第33-37页 |
| 1.7.1 sh RNA基因干扰技术 | 第33-34页 |
| 1.7.2 CRISPR-Cas9基因敲除技术 | 第34-35页 |
| 1.7.3 分子影像技术 | 第35-37页 |
| 1.8 文献评述与存在问题 | 第37-38页 |
| 1.9 主要研究内容与技术路线 | 第38-40页 |
| 1.9.1 主要研究内容 | 第38-39页 |
| 1.9.2 本文的技术路线 | 第39-40页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第40-61页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第40-44页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.1.2 实验试剂与耗材 | 第40-42页 |
| 2.1.3 实验仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.1.4 实验所用引物 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第44-60页 |
| 2.2.1 基于分子影像技术的小鼠在体成像 | 第44-45页 |
| 2.2.2 荧光定量聚合酶链式反应（q PCR） | 第45-46页 |
| 2.2.3 动物组织蛋白提取 | 第46页 |
| 2.2.4 组织骨钙素含量测定 | 第46-47页 |
| 2.2.5 免疫组织化学染色 | 第47页 |
| 2.2.6 原代睾丸间质细胞的分离培养 | 第47-49页 |
| 2.2.7 小鼠睾丸间质细胞系TM3的培养 | 第49页 |
| 2.2.8 萤光素酶活性检测 | 第49页 |
| 2.2.9 非羧化骨钙素制备 | 第49-51页 |
| 2.2.10 Western Blot | 第51-52页 |
| 2.2.11 过表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 2.2.12 PCR产物序列测序 | 第53-55页 |
| 2.2.13 稳定细胞系的构建 | 第55-56页 |
| 2.2.14 sh RNA慢病毒构建骨钙素敲低细胞系 | 第56-59页 |
| 2.2.15 CRISPR-Cas9载体构建 | 第59-60页 |
| 2.2.16 统计学方法 | 第60页 |
| 2.3 小结 | 第60-61页 |
| 第3章 骨钙素在睾丸间质细胞中表达 | 第61-80页 |
| 3.1 引言 | 第61页 |
| 3.2 利用分子影像技术在体检测骨钙素启动子活性部位 | 第61-64页 |
| 3.2.1 小鼠雄性性腺部位骨钙素启动子活性检测 | 第61-63页 |
| 3.2.2 小鼠睾丸组织中骨钙素启动子活性离体验证 | 第63-64页 |
| 3.3 睾丸组织骨钙素基因m RNA表达情况检测 | 第64-72页 |
| 3.3.1 小鼠睾丸组织中骨钙素基因检测 | 第64-66页 |
| 3.3.2 大鼠、牛睾丸组织中骨钙素基因检测 | 第66-68页 |
| 3.3.3 相邻基因表达产物对小鼠睾丸组织检测骨钙素的影响 | 第68-70页 |
| 3.3.4 小鼠睾丸组织骨钙素基因表达与周龄的关系 | 第70-71页 |
| 3.3.5 小鼠睾丸组织骨钙素蛋白质检测 | 第71-72页 |
| 3.4 小鼠睾丸组织表达骨钙素细胞类型分析 | 第72-76页 |
| 3.4.1 原代睾丸间质细胞与分离培养与鉴定 | 第74-75页 |
| 3.4.2 TM3小鼠睾丸间质细胞系中骨钙素的表达 | 第75-76页 |
| 3.5 VD3对睾丸间质细胞中骨钙素表达量的调节 | 第76-79页 |
| 3.5.1 VD3对骨钙素启动子活性的影响 | 第77-78页 |
| 3.5.2 VD3对睾丸间质细胞中骨钙素表达量的影响 | 第78-79页 |
| 3.6 小结 | 第79-80页 |
| 第4章 骨钙素表达对睾丸间质细胞睾酮合成的影响 | 第80-113页 |
| 4.1 引言 | 第80-81页 |
| 4.2 非羧化骨钙素对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响 | 第81-85页 |
| 4.2.1 非羧化骨钙素的纯化鉴定 | 第81-83页 |
| 4.2.2 非羧化骨钙素促进睾酮合成机制 | 第83-85页 |
| 4.3 骨钙素表达降低对睾丸间质细胞的影响 | 第85-89页 |
| 4.3.1 骨钙素sh RNA效率分析 | 第86-88页 |
| 4.3.2 骨钙素表达下降对睾丸间质细胞睾酮合成影响的机制研究 | 第88-89页 |
| 4.4 过表达骨钙素对睾丸间质细胞影响的机制研究 | 第89-98页 |
| 4.4.1 过表达骨钙素载体和稳定转染细胞系鉴定 | 第89-91页 |
| 4.4.2 骨钙素过表达对睾丸间质细胞增殖的影响 | 第91-92页 |
| 4.4.3 过表达骨钙素对细胞基础糖代谢能力的影响 | 第92-93页 |
| 4.4.4 过表达骨钙素对睾酮合成酶表达的影响 | 第93-94页 |
| 4.4.5 过表达骨钙素基因对SOX-9、Runx2基因的影响 | 第94-96页 |
| 4.4.6 非羧化骨钙素对睾丸间质细胞SOX-9 基因表达的影响 | 第96-97页 |
| 4.4.7 骨钙素敲低对睾丸间质细胞SOX-9 表达的影响 | 第97-98页 |
| 4.5 过表达骨钙素对小鼠睾丸组织的影响 | 第98-111页 |
| 4.5.1 睾丸特异性过表达骨钙素转基因小鼠制备 | 第98-100页 |
| 4.5.2 睾丸特异性过表达骨钙素对睾丸重量的影响 | 第100页 |
| 4.5.3 睾丸特异性过表达骨钙素对睾丸睾酮合成酶表达的影响 | 第100-101页 |
| 4.5.4 骨钙素过表达对睾丸SOX-9 基因表达的影响 | 第101-102页 |
| 4.5.5 骨钙素过表达对睾丸组织结构的影响 | 第102-104页 |
| 4.5.6 头低位卧床实验中骨钙素与睾酮含量变化与相关分析 | 第104-111页 |
| 4.6 小结 | 第111-113页 |
| 第5章 睾丸间质细胞骨钙素表达形式 | 第113-129页 |
| 5.1 引言 | 第113页 |
| 5.2 GGCX基因表达缺失对睾丸间质细胞功能影响的机制研究 | 第113-120页 |
| 5.2.1 睾丸和骨组织细胞中GGCX的表达 | 第113-115页 |
| 5.2.2 GGCX敲除细胞系的构建 | 第115-118页 |
| 5.2.3 GGCX表达缺失对睾酮合成酶表达的影响 | 第118-119页 |
| 5.2.4 GGCX敲除对SOX-9 表达的影响 | 第119-120页 |
| 5.3 法华林处理对睾丸间质细胞的影响 | 第120-127页 |
| 5.3.1 法华林对睾丸间质细胞糖代谢基因表达的影响 | 第120-121页 |
| 5.3.2 法华林对睾丸间质细胞骨钙素基因启动子活性的影响 | 第121-122页 |
| 5.3.3 法华林处理对过表达细胞系睾酮合成表达的影响 | 第122-124页 |
| 5.3.4 法华林处理对过表达细胞系SOX-9 和Runx2基因表达的影响 | 第124-126页 |
| 5.3.5 羟磷灰石对过表达骨钙素睾丸间质细胞的影响 | 第126-127页 |
| 5.3.6 非羧化骨钙素对TM3细胞骨钙素和GGCX的表达的影响 | 第127页 |
| 5.4 小结 | 第127-129页 |
| 结论 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-144页 |
| 附录 | 第144-148页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第148-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 个人简历 | 第151页 |
