| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 生物质的资源化利用方式 | 第11页 |
| 1.2 木质纤维素的成分及其降解转化效率 | 第11-15页 |
| 1.2.1 植物细胞壁的组成和结构 | 第11-14页 |
| 1.2.2 制约木质纤维素降解转化的关键因素 | 第14-15页 |
| 1.3 阿魏酸在细胞壁中的存在形式和应用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 细胞壁中的阿魏酸化 | 第15-16页 |
| 1.3.2 阿魏酸的制备和应用 | 第16-17页 |
| 1.4 阿魏酸酯酶的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.4.1 阿魏酸酯酶的来源与类型 | 第17-18页 |
| 1.4.2 阿魏酸酯酶的基因克隆及异源表达 | 第18-19页 |
| 1.4.3 阿魏酸酯酶在植物细胞中的表达可提高木质纤维素降解效率 | 第19-20页 |
| 1.5 嗜热木质纤维素降解酶的利用潜力 | 第20页 |
| 1.6 实现外源基因在植物内高效表达的途径 | 第20-22页 |
| 1.6.1 启动子的挑选 | 第20-21页 |
| 1.6.2 优化外源基因的序列 | 第21页 |
| 1.6.3 添加蛋白质靶向定位信号肽 | 第21-22页 |
| 1.6.4 消除位置效应 | 第22页 |
| 1.6.5 增强外源基因的翻译 | 第22页 |
| 1.7 本文的研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第22页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 1.7.3 本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 嗜热阿魏酸酯酶的基因克隆、异源表达及酶学特性分析 | 第24-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第24页 |
| 2.1.2 主要分子试剂及试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第25-26页 |
| 2.1.4 培养基和溶液 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.1.7 引物设计及合成 | 第28页 |
| 2.1.8 PCR扩增嗜热阿魏酸酯酶基因 | 第28-29页 |
| 2.1.9 DNA的琼脂糖电泳检测及回收纯化 | 第29页 |
| 2.1.10 DNA的双酶切及回收 | 第29-30页 |
| 2.1.11 双酶切回收产物的连接反应 | 第30页 |
| 2.1.12 连接产物的转化 | 第30页 |
| 2.1.13 阳性克隆的分子鉴定 | 第30-31页 |
| 2.1.14 重组嗜热阿魏酸酯酶的诱导表达 | 第31页 |
| 2.1.15 SDS-PAGE凝胶分析 | 第31-32页 |
| 2.1.16 去淀粉去蛋白质麦麸（DSWB）的制备 | 第32页 |
| 2.1.17 嗜热阿魏酸酯酶的纯化 | 第32-36页 |
| 2.2 结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.2.1 嗜热阿魏酸酯酶基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建及分子验证 | 第37页 |
| 2.2.3 嗜热阿魏酸酯酶在BL21(DE3)中的表达及纯化检测分析 | 第37-39页 |
| 2.2.4 重组嗜热阿魏酸酯酶的酶学性质 | 第39-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-44页 |
| 2.4 本章小节 | 第44-45页 |
| 第三章 嗜热阿魏酸酯酶基因植物高效表达载体的构建 | 第45-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-53页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第45页 |
| 3.1.2 主要分子试剂及试剂盒 | 第45-46页 |
| 3.1.3 培养基和试剂 | 第46页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第46页 |
| 3.1.5 农杆菌感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| 3.1.6 嗜热阿魏酸酯酶编码基因的密码子优化 | 第47-49页 |
| 3.1.7 PCR扩增目的基因 | 第49页 |
| 3.1.8 PCR产物末端加A反应 | 第49-50页 |
| 3.1.9 连接反应 | 第50页 |
| 3.1.10 重组DNA的转化及测序验证 | 第50-51页 |
| 3.1.11 重组DNA的双酶切及目的片段的回收 | 第51页 |
| 3.1.12 酶切产物的连接反应 | 第51-52页 |
| 3.1.13 转化、验证 | 第52页 |
| 3.1.14 重组基因根癌农杆菌转化 | 第52-53页 |
| 3.2 结果与分析 | 第53-56页 |
| 3.2.1 嗜热阿魏酸酯酶基因的优化及生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 3.2.2 嗜热阿魏酸酯酶基因的PCR扩增 | 第54页 |
| 3.2.3 植物高效表达载体的构建及分子验证 | 第54-56页 |
| 3.3 讨论 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 全文总结 | 第59页 |
| 4.2 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第71页 |
