| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-30页 |
| 1.1 引言 | 第10-13页 |
| 1.2 抗血栓活性物质的研究现状 | 第13-29页 |
| 1.2.1 动物来源的抗血栓活性物质 | 第13-17页 |
| 1.2.1.1 肝素类（Heparin） | 第13页 |
| 1.2.1.2 水蛭素（Hirudin） | 第13-14页 |
| 1.2.1.3 蚓激酶（Lumbrokinase） | 第14页 |
| 1.2.1.4 尿激酶（Urine Kinase，UK） | 第14-15页 |
| 1.2.1.5 蛇毒来源的溶栓剂 | 第15页 |
| 1.2.1.6 组织型纤溶酶原激活剂（Tissue type plasminogen activator，t-PA） | 第15-16页 |
| 1.2.1.7 其他动物来源 | 第16-17页 |
| 1.2.2 植物来源的抗血栓活性物质 | 第17-20页 |
| 1.2.2.1 川芎嗪和阿魏酸 | 第17页 |
| 1.2.2.2 莽草酸 | 第17页 |
| 1.2.2.3 西红花酸 | 第17-18页 |
| 1.2.2.4 银杏总内酯 | 第18页 |
| 1.2.2.5 芪芍双苷 | 第18页 |
| 1.2.2.6 白芍总苷 | 第18页 |
| 1.2.2.7 京尼平苷和京尼平 | 第18-19页 |
| 1.2.2.8 褐藻糖胶 | 第19页 |
| 1.2.2.9 复方藻酸双酯钠 | 第19页 |
| 1.2.2.10 其他 | 第19-20页 |
| 1.2.3 化学合成的抗血栓活性物质 | 第20-23页 |
| 1.2.3.1 他汀类药物 | 第20-21页 |
| 1.2.3.2 阿司匹林 | 第21页 |
| 1.2.3.3 华法林 | 第21页 |
| 1.2.3.4 戊聚糖钠 | 第21-22页 |
| 1.2.3.5 双嘧达莫 | 第22页 |
| 1.2.3.6 噻氯吡啶 | 第22页 |
| 1.2.3.7 氯吡格雷 | 第22页 |
| 1.2.3.8 吲哚布芬 | 第22-23页 |
| 1.2.3.9 替罗非班 | 第23页 |
| 1.2.4 基因重组技术来源的抗血栓活性物质 | 第23-25页 |
| 1.2.4.1 重组水蛭素 | 第23页 |
| 1.2.4.2 重组葡激酶 | 第23页 |
| 1.2.4.3 抗凝活性肽RGD226 | 第23-24页 |
| 1.2.4.4 导向性溶栓剂 | 第24页 |
| 1.2.4.5 重组沙蚕溶栓活性蛋白酶 | 第24页 |
| 1.2.4.6 重组枯草杆菌纤溶酶 | 第24页 |
| 1.2.4.7 重组组织型纤溶酶原激活剂 | 第24-25页 |
| 1.2.4.8 重组瑞替普酶 | 第25页 |
| 1.2.5 微生物来源的抗血栓活性物质 | 第25-29页 |
| 1.2.5.1 链激酶（Streptokinase，SK） | 第25-26页 |
| 1.2.5.2 葡激酶（Staphylokinase，SAK） | 第26页 |
| 1.2.5.3 纳豆激酶（Nattokinase，NK） | 第26-27页 |
| 1.2.5.4 海洋假单胞菌碱性蛋白酶（Marine pseudomonas alkaline protease，MPAP） | 第27页 |
| 1.2.5.5 凝血酶抑制剂S-254 | 第27页 |
| 1.2.5.6 细菌DR-929 培养物 | 第27-28页 |
| 1.2.5.7 纤溶活性酶SW-1 | 第28页 |
| 1.2.5.8 其他 | 第28-29页 |
| 1.3 立题依据和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 抗凝活性蛋白产生菌的菌株选育和发酵条件的初步研究 | 第30-57页 |
| 2.1 材料和方法 | 第30-37页 |
| 2.1.1 出发菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂和实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要培养基和培养方法 | 第31-32页 |
| 2.1.3.1 培养基 | 第31页 |
| 2.1.3.2 培养方法 | 第31-32页 |
| 2.1.4 方法 | 第32-37页 |
| 2.1.4.1 菌体生长量 | 第32页 |
| 2.1.4.2 紫外诱变 | 第32-33页 |
| 2.1.4.3 突变株筛选 | 第33页 |
| 2.1.4.4 抗凝活性的检测 | 第33-34页 |
| 2.1.4.5 筛选流程 | 第34-36页 |
| 2.1.4.6 种子培养基对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第36页 |
| 2.1.4.7 种龄对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第36页 |
| 2.1.4.8 接种量对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第36页 |
| 2.1.4.9 碳源对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第36页 |
| 2.1.4.10 氮源对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第36页 |
| 2.1.4.11 碳氮源的正交试验 | 第36-37页 |
| 2.1.4.12 无机盐对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第37页 |
| 2.1.4.13 装量对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第37页 |
| 2.1.4.14 培养温度对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第37页 |
| 2.1.4.15 摇床转速对对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第37页 |
| 2.2 结果和讨论 | 第37-56页 |
| 2.2.1 出发菌株的生长与抗凝活性 | 第37-38页 |
| 2.2.2 紫外诱变时间的确定 | 第38-39页 |
| 2.2.3 形态突变株的筛选 | 第39-40页 |
| 2.2.4 抗性突变株的筛选 | 第40-43页 |
| 2.2.4.1 硫酸铜抗性突变株 | 第40-41页 |
| 2.2.4.2 放线菌酮抗性突变株 | 第41-43页 |
| 2.2.5 高活性突变株的筛选 | 第43-45页 |
| 2.2.6 种子培养对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第45-47页 |
| 2.2.6.1 种子培养基对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第45页 |
| 2.2.6.2 种龄对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第45-46页 |
| 2.2.6.3 接种量对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第46-47页 |
| 2.2.7 发酵培养基的组成对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第47-54页 |
| 2.2.7.1 碳源对菌体生长及抗凝活性的影响 | 第47-48页 |
| 2.2.7.2 氮源对菌体生长及抗凝活性的影响 | 第48-49页 |
| 2.2.7.3 培养基碳氮源的正交优化试验 | 第49-52页 |
| 2.2.7.4 无机盐对菌丝生长及抗凝活性的影响 | 第52-54页 |
| 2.2.8 培养条件对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第54-56页 |
| 2.2.8.1 摇瓶装量对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第54页 |
| 2.2.8.2 培养温度对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第54-55页 |
| 2.2.8.3 转速对菌体生长和抗凝活性的影响 | 第55-56页 |
| 2.3 结论 | 第56-57页 |
| 第三章 抗凝活性蛋白的分离纯化和初步药效研究 | 第57-79页 |
| 3.1 材料和方法 | 第57-64页 |
| 3.1.1 菌株和实验动物 | 第57页 |
| 3.1.2 主要培养基 | 第57页 |
| 3.1.3 主要试剂和仪器 | 第57-58页 |
| 3.1.4 方法 | 第58-64页 |
| 3.1.4.1 发酵培养 | 第58页 |
| 3.1.4.2 发酵液预处理 | 第58页 |
| 3.1.4.3 硫酸铵盐析 | 第58页 |
| 3.1.4.4 离子交换树脂DEAE Cellulose DE-52 分离 | 第58-60页 |
| 3.1.4.5 凝胶层析Sephadex G-100 分离 | 第60页 |
| 3.1.4.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第60-61页 |
| 3.1.4.7 TA-P 蛋白的分析测试 | 第61页 |
| 3.1.4.8 TA-P 对小鼠全血凝固时间（Clotting time,CT）的影响 | 第61-62页 |
| 3.1.4.9 TA-P 对小鼠全血块凝块溶解程度的影响 | 第62页 |
| 3.1.4.10 急性毒性试验 | 第62页 |
| 3.1.4.11 出血和溶血安全性检查 | 第62-63页 |
| 3.1.4.12 TA-P 对血浆复钙时间（Recalcification time,RT）的影响 | 第63页 |
| 3.1.4.13 TA-P 对人纤维蛋白原的降解作用 | 第63页 |
| 3.1.4.14 TA-P 对人纤维蛋白的溶解作用 | 第63-64页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第64-78页 |
| 3.2.1 抗凝活性蛋白TA-P 的分离纯化 | 第64-69页 |
| 3.2.1.1 不同饱和度硫酸铵沉淀物的抗凝活性 | 第64-65页 |
| 3.2.1.2 DEAE-Cellulose DE-52 离子交换分离 | 第65-66页 |
| 3.2.1.3 凝胶层析Sephadex G-100 分离 | 第66-67页 |
| 3.2.1.4 TA-P 的分离纯化流程 | 第67-69页 |
| 3.2.2 抗凝活性蛋白TA-P 的初步鉴定 | 第69-71页 |
| 3.2.3 TA-P 初步药效和安全性 | 第71-75页 |
| 3.2.3.1 TA-P 对小鼠全血凝固时间（CT）的影响 | 第71页 |
| 3.2.3.2 TA-P 对小鼠全血凝块溶解的影响 | 第71-72页 |
| 3.2.3.3 TA-P 的急性毒性试验 | 第72-73页 |
| 3.2.3.4 TA-P 的出血和溶血安全性检查 | 第73-75页 |
| 3.2.4 TA-P 的作用机制 | 第75-78页 |
| 3.2.4.1 TA-P 的抗凝作用方式 | 第75页 |
| 3.2.4.2 TA-P 对血浆复钙时间（RT）的影响 | 第75-76页 |
| 3.2.4.3 TA-P 对人纤维蛋白原的降解作用 | 第76-77页 |
| 3.2.4.5 TA-P 对人纤维蛋白的溶解作用 | 第77-78页 |
| 3.3 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
