| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-46页 |
| 1.1 大豆遗传转化方法 | 第14-22页 |
| 1.1.1 农杆菌介导法 | 第15-17页 |
| 1.1.2 基因枪法 | 第17-18页 |
| 1.1.3 花粉管通道法 | 第18-19页 |
| 1.1.4 其它几种转化方法 | 第19-22页 |
| 1.1.4.1 聚乙二醇法 | 第20页 |
| 1.1.4.2 电激法 | 第20-21页 |
| 1.1.4.3 脂质体法 | 第21页 |
| 1.1.4.4 显微注射法 | 第21页 |
| 1.1.4.5 农杆菌介导原位转基因方法 | 第21-22页 |
| 1.2 大豆转化受体系统 | 第22-27页 |
| 1.2.1 器官发生体系 | 第23-25页 |
| 1.2.1.1 子叶节 | 第23-24页 |
| 1.2.1.2 其它器官发生体系 | 第24-25页 |
| 1.2.2 胚性悬浮培养 | 第25页 |
| 1.2.3 原生质体 | 第25-26页 |
| 1.2.4 子房 | 第26页 |
| 1.2.5 发状根 | 第26-27页 |
| 1.3 植物抗虫基因的研究和利用 | 第27-41页 |
| 1.3.1 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因 | 第27-28页 |
| 1.3.2 蛋白酶抑制剂基因 | 第28-33页 |
| 1.3.2.1 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 | 第30-31页 |
| 1.3.2.2 马铃薯蛋白酶抑制剂基因 | 第31-32页 |
| 1.3.2.3 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 | 第32-33页 |
| 1.3.3 植物凝集素基因 | 第33-37页 |
| 1.3.3.1 雪花莲外源凝集素基因 | 第34-35页 |
| 1.3.3.2 豌豆凝集素基因 | 第35-36页 |
| 1.3.3.3 麦胚凝集素基因 | 第36页 |
| 1.3.3.4 半夏凝集素基因 | 第36-37页 |
| 1.3.4 其它抗虫基因 | 第37-39页 |
| 1.3.4.1 淀粉酶抑制剂基因 | 第37-38页 |
| 1.3.4.2 几丁质酶基因 | 第38页 |
| 1.3.4.3 昆虫毒素基因 | 第38-39页 |
| 1.3.5 其它抗虫基因工程方法 | 第39-41页 |
| 1.4 植物抗虫基因工程研究中存在的问题及策略 | 第41-43页 |
| 1.4.1 外源基因表达的稳定性 | 第41-42页 |
| 1.4.2 昆虫产生抗性 | 第42页 |
| 1.4.3 标记基因的安全性 | 第42-43页 |
| 1.5 大豆抗虫基因工程研究展望 | 第43-44页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第44-46页 |
| 第二部分 大豆整个子叶节再生体系的建立以及与子叶节、胚尖再生体系的比较研究 | 第46-73页 |
| 2.1 材料与方法 | 第47-54页 |
| 2.1.1 供试大豆品种 | 第47页 |
| 2.1.2 培养基 | 第47-49页 |
| 2.1.2.1 基本培养基 | 第47页 |
| 2.1.2.2 大豆整个子叶节外植体不同阶段的培养基 | 第47-49页 |
| 2.1.2.3 三种不同外植体不同阶段的培养基条件 | 第49页 |
| 2.1.3 实验步骤 | 第49-52页 |
| 2.1.3.1 外植体获得及不定芽再生 | 第49-52页 |
| 2.1.3.2 大豆不定根的诱导与再生植株的形成 | 第52页 |
| 2.1.4 培养条件 | 第52页 |
| 2.1.5 石蜡切片 | 第52-54页 |
| 2.1.5.1 染色方法 | 第52页 |
| 2.1.5.2 石蜡切片的步骤 | 第52-54页 |
| 2.2 结果与分析 | 第54-67页 |
| 2.2.1 大豆整个子叶节再生体系的建立和优化 | 第54-62页 |
| 2.2.1.1 不同预处理对大豆种子萌发和芽再生的影响 | 第54-56页 |
| 2.2.1.2 CPPU 和BA 在诱导大豆整个子叶节外植体芽再生的比较 | 第56-59页 |
| 2.2.1.3 利用正交设计筛选最适芽诱导培养基以及考察几个因素的影响 | 第59-62页 |
| 2.2.1.4 整个子叶节再生体系的建立 | 第62页 |
| 2.2.2 整个子叶节再生过程中的组织化学观察 | 第62-64页 |
| 2.2.3 三种目前常用的大豆器官发生再生体系的比较 | 第64-67页 |
| 2.2.3.1 三种不同外植体不同培养时间出芽以及芽伸长情况的比较 | 第64-65页 |
| 2.2.3.2 三种外植体培养30 d 后再生频率的比较 | 第65-66页 |
| 2.2.3.3 三种不同外植体再生周期的比较 | 第66-67页 |
| 2.3 讨论 | 第67-73页 |
| 第三部分 根癌农杆菌介导的双价抗虫基因在大豆上的转化 | 第73-97页 |
| 3.1 材料与方法 | 第74-83页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第74-75页 |
| 3.1.1.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第75页 |
| 3.1.1.2 质粒DNA 冻融法转化三种根癌农杆菌 | 第75页 |
| 3.1.2 农杆菌介导的大豆整个子叶节转化体系 | 第75-77页 |
| 3.1.2.1 供试大豆品种 | 第75-76页 |
| 3.1.2.2 大豆组织培养和遗传转化中所使用的培养基及其成分 | 第76页 |
| 3.1.2.3 农杆菌的培养 | 第76-77页 |
| 3.1.2.4 根癌农杆菌介导的大豆整个子叶节再生和遗传转化 | 第77页 |
| 3.1.3 大豆转化植株的分子验证和抗性检测 | 第77-82页 |
| 3.1.3.1 PCR 检测 | 第77-79页 |
| 3.1.3.2 转基因植株Southern blot 分析 | 第79-82页 |
| 3.1.4 除草剂抗性检测 | 第82-83页 |
| 3.1.5 蚜虫抗性检测 | 第83页 |
| 3.2 结果与分析 | 第83-95页 |
| 3.2.1 抗生素和除草剂浓度筛选 | 第83-85页 |
| 3.2.2 不同农杆菌菌株和大豆基因型对转化效率的影响 | 第85-86页 |
| 3.2.3 转基因植株的分子鉴定 | 第86-89页 |
| 3.2.3.1 转基因植株的PCR 检测 | 第86-88页 |
| 3.2.3.2 Southern 杂交鉴定 | 第88-89页 |
| 3.2.4 转基因后代（T_1 代）的抗除草剂测试 | 第89-91页 |
| 3.2.4.1 草丁膦浓度的确定 | 第89-90页 |
| 3.2.4.2 转基因植株抗除草剂鉴定 | 第90-91页 |
| 3.2.5 转基因植株后代（T_1 代）抗蚜虫鉴定与遗传分析 | 第91-95页 |
| 3.3 讨论 | 第95-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 缩写词表 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文和专利 | 第117-119页 |
