| 缩写词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1.1 高等植物肌动蛋白研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1.1 高等植物肌动蛋白的性质 | 第11页 |
| 1.1.1.2 高等植物肌动蛋白的功能 | 第11-13页 |
| 1.1.1.3 肌动蛋白的分子生物学研究 | 第13页 |
| 1.1.2 种子贮藏蛋白及其基因启动子研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.2.1 植物启动子的一般结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 种子贮藏蛋白基因启动子的结构和功能研究 | 第15-16页 |
| 1.1.2.3 种子贮藏蛋白基因启动子的应用 | 第16页 |
| 1.1.2.4 问题与展望 | 第16-17页 |
| 1.1.3 反义 RNA技术及其在植物学研究中的应用 | 第17-22页 |
| 1.1.3.1 天然存在的反义 RNA及其作用 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 反义 RNA的作用机理 | 第18-19页 |
| 1.1.3.3 反义 RNA技术在植物学研究中的应用 | 第19-22页 |
| 1.2 引言 | 第22-23页 |
| 1.2.1 研究目的和意义 | 第22页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 购买的药品及试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.5 常用试剂及配制 | 第24-26页 |
| 2.1.5.1 高盐低 pH值法所用主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.5.2 SDS法所用主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5.3 CTAB法所用主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.5.4 蓝白斑筛选用试剂 | 第25页 |
| 2.1.5.5 细菌培养基 | 第25页 |
| 2.1.5.6 碱法提取质粒 DNA所用溶液 | 第25页 |
| 2.1.5.7 常用抗生素储备液浓度 | 第25页 |
| 2.1.5.8 其他分子生物学常用溶液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 蓝猪耳基因组 DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 高盐低pH值法 | 第26页 |
| 2.2.1.2 SDS法 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 CTAB法 | 第27页 |
| 2.2.1.4 蓝猪耳基因组 DNA产量和质量的检测 | 第27页 |
| 2.2.2 蓝猪耳肌动蛋白基因的克隆 | 第27-32页 |
| 2.2.2.1 PCR引物的设计 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 PCR预扩增 | 第28页 |
| 2.2.2.3 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.2.4 PCR产物的切胶回收 | 第29页 |
| 2.2.2.5 PCR产物与载体的连接 | 第29-30页 |
| 2.2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的转化与蓝白斑筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.2.8 重组质粒的小量提取(碱裂解法) | 第31页 |
| 2.2.2.9 重组质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.2.2.10 重组质粒的PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.2.11 PCR产物的测序 | 第32页 |
| 2.2.3 蓝猪耳肌动蛋白基因的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.2.3.1 测序结果的同源性检索分析 | 第32页 |
| 2.2.3.2 蓝猪耳肌动蛋白基因外显子/内含子的预测 | 第32页 |
| 2.2.3.3 蓝猪耳肌动蛋白基因编码氨基酸序列的推导 | 第32页 |
| 2.2.3.4 蓝猪耳肌动蛋白基因编码氨基酸序列中肌动蛋白信号的搜索 | 第32页 |
| 2.2.3.5 蓝猪耳肌动蛋白基因编码氨基酸序列的同源建模 | 第32-33页 |
| 2.2.3.6 蓝猪耳肌动蛋白基因的系统发育分析 | 第33页 |
| 2.2.4 蓝猪耳肌动蛋白基因在叶片中的表达分析 | 第33-35页 |
| 2.2.4.1 蓝猪耳 RNA的提取与快速检测 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 蓝猪耳第一链cDNA的合成 | 第34页 |
| 2.2.4.3 蓝猪耳TF-ACT2部分编码区的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.5 反义蓝猪耳肌动蛋白基因种子特异性表达载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.5.1 反义TF-ACF2基因片段的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.5.2 中间载体pCAMBIA1390~+的构建 | 第36-38页 |
| 3 结果和分析 | 第38-55页 |
| 3.1 不同提取方法的DNA纯度和产率 | 第38页 |
| 3.2 三种提取方法的DNA完整性 | 第38-39页 |
| 3.3 Mg~(2+)浓度梯度对 PCR扩增效果的影响 | 第39-40页 |
| 3.4 PCR扩增结果与产物的克隆鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4.1 肌动蛋白基因部分序列的PCR扩增与克隆鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4.2 肌动蛋白基因全长序列的PCR扩增与克隆鉴定 | 第41页 |
| 3.5 重组质粒插入片段的测序 | 第41-43页 |
| 3.5.1 重组质粒pAct.tf 1插入片段的测序 | 第41-42页 |
| 3.5.2 重组质粒pAct.tf 2插入片段的测序 | 第42-43页 |
| 3.6 蓝猪耳肌动蛋白基因的生物信息学分析 | 第43-52页 |
| 3.6.1 重组质粒插入片段测序结果的同源性检索分析 | 第43-44页 |
| 3.6.2 TF-ACT1、TF-ACT2外显子/内含子的预测 | 第44-47页 |
| 3.6.3 TF-ACT2编码氨基酸序列的推导 | 第47-49页 |
| 3.6.4 TF-ACT2编码氨基酸序列中肌动蛋白信号的搜索 | 第49-50页 |
| 3.6.5 TF-ACT2编码氨基酸序列的同源建模 | 第50页 |
| 3.6.6 蓝猪耳肌动蛋白基因的系统发育分析 | 第50-52页 |
| 3.7 蓝猪耳TF-ACT2在叶片中的表达分析 | 第52页 |
| 3.8 反义蓝猪耳肌动蛋白基因种子特异性表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 3.8.1 pAct.tf 459的验证 | 第52-54页 |
| 3.8.1.1 pAct.tf459的Bgl II/BstE II双酶切验证 | 第53页 |
| 3.8.1.2 pAct.tf459的 PCR验证 | 第53-54页 |
| 3.8.2 中间载体pCAMBIA1390~+的验证 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 试验材料的选择 | 第55页 |
| 4.2 蓝猪耳基因组 DNA的提取 | 第55-56页 |
| 4.3 PCR条件的优化 | 第56-57页 |
| 4.4 蓝猪耳肌动蛋白基因的克隆策略 | 第57页 |
| 4.5 分子生物学和生物信息学分析软件的使用 | 第57-58页 |
| 4.6 肌动蛋白基因的分子系统发育分析 | 第58-59页 |
| 4.7 利用蓝猪耳肌动蛋白基因种子特异性反义表达获得无核性状的理论设想 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 图版 | 第66-68页 |
| 在读期间发表论文目录 | 第68-69页 |
| 附录 扩增片段测序报告 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
